伪狂犬病病毒鄂A株包膜糖蛋白gD基因的克隆与表达

摘要

克隆了伪狂犬病病毒鄂A株编码包膜糖蛋白gD的基因并进行了序列测定,与国外报道的Rice株相比,其核苷酸序列具有98%的同源性,推导氨基酸序列同源性为97%.将此基因克隆于具有全期启动子盒的杆状病毒转移载体pSX35A中,构建成重组转移质粒pSX35A-gD,与致死缺失型线性化苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV-OCC-)基因组DNA一起共转染粉纹夜蛾Hi5细胞,经同源重组,获得含gD基因的重组病毒AcMNPV-OCC+-gD.重组病毒经空斑纯化后感染Hi5细胞进行表达分析,细胞裂解物的SDS-PAGE及Western-Blotting均显示分子量约47kD的gD蛋白得到了特异性表达,其表达量占细胞总蛋白的6.2%,表达的gD蛋白具有免疫原性.