杆状病毒表达系统

摘要： 干扰素具有广谱抗病毒、抗肿瘤活性,可增强机体抗病毒能力,已经广泛应用于病毒性疾病的防控。小反刍兽疫病毒是危害山羊、绵羊等小反刍动物常见的病毒之一,该病毒的传播对全球养殖业造成了严重的影响。为了表达具有高效抗病毒活性的羊α干扰素(OviIFN-α),将OviIFN-α基因序列根据家蚕密码子偏好性进行优化合成,构建pVL1393-OviIFN-α转移载体,将转移载体与ORF1629缺失型杆状病毒基因组DNA利用脂质体介导的转染法在BmN细胞中进行重组,重组病毒感染家蚕,在蚕血淋巴液中获取重组蛋白OviIFN-α。利用微量细胞病变抑制法在BHK-VSV*GFP系统中检测到该蛋白表达量可达6.5×10^(5)U/mL左右。小反刍兽疫病毒增殖抑制实验显示,羊α干扰素对小反刍兽疫病毒在BHK细胞中的复制产生了明显的抑制作用,IC_(50)为136.93 U左右。该结果为羊α干扰素用于小反刍兽疫疫情防控提供了重要的理论依据。

摘要： pB602L蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)的非结构蛋白之一。本研究利用杆状病毒表达系统表达了ASFV pB602L蛋白并制备了该蛋白的鼠源多克隆抗体。将B602L基因克隆入杆状病毒载体pFastbac dual中构建pFast dual-B602L重组质粒,将重组质粒pFast dual-B602L转化至DH10Bac感受态中,经过3次蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒Bacmid-B602L。将重组质粒转染草地贪夜蛾卵巢细胞系(sf9)细胞,获得重组杆状病毒rBac-B602L,细胞出现病变后,在sf9中传3代。通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验鉴定pB602L蛋白的表达及其反应原性。然后使用纯化的pB602L蛋白作为免疫原制备鼠源抗pB602L蛋白多克隆抗体,经过4次免疫后,采取血清以获得抗pB602L蛋白的多克隆抗体,为后续应用ASFV B602L蛋白检测做准备。结果:在重组杆状病毒表达系统中成功表达pB602L蛋白,可被His抗体检测,并可被ASFV阳性血清特异性识别,制备的多克隆抗体具有较高的特异性。本研究表明杆状病毒系统表达的pB602L蛋白具有良好的抗原性,为后续开展非洲猪瘟亚单位疫苗研究和检测奠定基础。

摘要： β-防御素是鱼类天然免疫的重要组成部分,通过杆状表达系统表达大口黑鲈β-防御素,研究其具有高效、广谱的不同于抗生素的独特抗菌的能力。研究通过序列分析,发现大口黑鲈β-防御素(MSBdefe)与其他物种β-防御素具有相似的特征,都包含6个保守的半胱氨酸。将MSBdefe基因进行昆虫密码子优化合成后,克隆至穿梭载体pYBDM-IM质粒中,构建成为重组质粒MSBdefe-pYBDM-IM,重组质粒转化感受态细胞MultiBac/rSW106/asd-/inv+,阳性重组菌株MSBdefe-pYBDM-IM-Am直接用于Sf9细胞的感染,获得重组杆状病毒AV-MSBdefe。通过SDS-PAGE和Western Blot检测AV-MSBdefe感染Sf9细胞后蛋白表达,结果表明成功获得MSBdefe重组蛋白。通过对淡水鱼类最常见的病原菌嗜水气单胞菌的抑菌活性分析,结果显示当MSBdefe重组蛋白的终浓度为30μg/mL时,抑菌效率为83.00%,并随着蛋白稀释2倍、4倍后,即终浓度为15和7.5μg/mL时,抑菌效果逐渐减弱,抑菌效率分别为54.33%和33.67%,进而验证了大口黑鲈β-防御素能够抑制嗜水气单胞菌的生长,且随着蛋白浓度的降低抑制能力下降。这些结果为利用昆虫生物反应器规模化生产鱼类β-防御素奠定了基础,以期为开发能够替代或部分替代抗生素的天然抗菌剂提供良好的候选者和技术途径。

摘要： 为获得鸡源CD40L (chCD40L)蛋白,以鸡脾细胞制备cDNA并以之为模板扩增chCD40L基因,构建pFastBac-chCD40L供体重组质粒,转化感受态细胞DH 10Bac,通过筛选及鉴定获得Bacmid-chCD40L重组质粒,转入真核表达系统sf9昆虫细胞进行蛋白表达与纯化,获得His-chCD40L蛋白.此外,构建pQM01-chCD40L质粒,转染HEK 293T细胞进行蛋白表达与纯化,获得Strep-chCD40L蛋白.亲和层析纯化的chCD40L蛋白浓度为0.01 mg/mL.为检测chCD40L蛋白的生物活性,分离和培养3周龄SPF雏鸡的法氏囊组织原代细胞,将chCD40L加入细胞培养液刺激细胞增殖,通过Western blotting试验、间接免疫荧光试验、流式细胞术检测,发现该蛋白能够与法氏囊B淋巴细胞表面的CD40结合,说明chCD40L具有生物活性.成功获得chCD40L蛋白,为原代B淋巴细胞体外培养及IBDV野毒分离与诊断奠定了基础.

摘要： 为了防控猪场塞内卡谷病毒(SVV)和圆环病毒2型(PCV2)的混合感染,本试验建立了一种猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒疫苗的制备方法并进行抗体检测.试验将猪SVV P1基因部分VP3序列替换为PCV2ORF2基因C端部分多肽序列,利用杆状病毒表达系统获得表达猪SVV、PCV2嵌合重组蛋白的重组杆状病毒,将病毒培养物纯化,经蛋白检测及电镜观察确定成功构建猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒(大小约30 nm).结果 表明,制备的猪SVV、PCV2嵌合病毒样颗粒疫苗可使试验猪同时产生针对猪SVV和PCV2的特异性抗体,充分显示出其作为一种针对猪场SVV和PCV2合并感染的安全有效疫苗的前景.

摘要： 为研发非洲猪瘟病毒的免疫诊断学试剂,利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达非洲猪瘟病毒p22蛋白,制备抗p22蛋白单克隆抗体并鉴定其与非洲猪瘟病毒的反应性.结果 显示,成功制备重组杆状病毒AcNPV-p22,表达得到大小约22 ku可溶性的重组p22蛋白.Western blot鉴定结果表明,重组p22蛋白可以与非洲猪瘟病毒阳性血清发生特异性反应.筛选到能够稳定分泌抗非洲猪瘟病毒p22蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3D2、4A7),腹水ELISA效价均高于1∶128000;单克隆抗体亚类分型鉴定结果表明,重链均为IgG1,轻链均为κ;间接免疫荧光试验(IFA)结果表明,制备的单克隆抗体能与非洲猪瘟病毒发生特异性反应.综上,利用杆状病毒-昆虫表达系统成功表达了可溶性的非洲猪瘟病毒重组p22蛋白,并制备抗p22蛋白单克隆抗体.

摘要： 将蜂毒素信号肽、全长鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白、流感病毒HA跨膜区序列和胞内区序列融合制备成嵌合鞭毛蛋白,对其氨基酸序列和核苷酸进行理化特征、疏水性、二级结构、三级结构及稀有密码子特征展开分析,并进一步制备表达目的基因的重组杆状病毒。实验结果表明嵌合鞭毛蛋白可以在昆虫细胞内表达。

摘要： 将蜂毒素信号肽、全长鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白、流感病毒HA跨膜区序列和胞内区序列融合制备成嵌合鞭毛蛋白,对其氨基酸序列和核苷酸进行理化特征、疏水性、二级结构、三级结构及稀有密码子特征展开分析,并进一步制备表达目的基因的重组杆状病毒。实验结果表明嵌合鞭毛蛋白可以在昆虫细胞内表达。

摘要： 传统昆虫细胞杆状病毒表达系统(IBEvS)重组成功率仅有0.1％～1％,而Bac-to-Bac表达系统由于病毒载体重组在大肠杆菌中就可以完成,并且其杆状病毒质粒包含了多种抗性基因及LacZ缺失标记,重组病毒成功率可以达到100％.利用基于荧光的体积排阻色谱检测法,不用纯化就可以对蛋白的表达量、稳定性以及在去垢剂中的行为进行监测.提高和优化蛋白表达的主要方法有：减少蛋白降解;更改多角体基因上下游序列;更改启动子;利用转基因昆虫细胞系.利用IBEVS表达重组蛋白，减少重组蛋白降解的主要改进策略有：构建蛋白酶基因缺失的载体，如缺少半胱氨酸蛋白酶和几丁质酶等的杆状病毒载体；通过改变溶氧、pH等条件来降低重组蛋白的降解作用；添加蛋白酶抑制剂等。选用不同的昆虫细胞系能够拓展昆虫杆状病毒系统糖基化处理能力，例如High Five细胞所表达的重组蛋白在糖基化修饰方面比Sf9细胞更为复杂，将哺乳动物糖基化酶基因引入野生杆状病毒载体从而构建转基因昆虫细胞系。

摘要： 甘蓝夜蛾核型多角体病毒(Mamestra brassicae multiple nucleopolyhedrovirus,MbMNPV)是一种广谱杀虫病毒,该病毒编码一个独特的增效蛋白基因(enhancin,en),可能对MbMNPV既广谱又高效的杀虫活性具有重要意义.本文利用杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac)构建含有全长基因en和截短en1、en2的AcMNPV重组病毒vAc-ph-en、vAc-ph-en1和vAc-ph-en2.TEM分析显示外源片段的插入对重组病毒形态和包埋的ODV数量没有影响,全长enhancin基因插入可能不干扰病毒多角体的形成.生物测定试验结果表明,重组病毒vAc-ph-en和vAc-ph-en2对2龄甜菜夜蛾的杀虫活性与对照组vAc-ph差异显著,分别为对照组的1.966倍和4.675倍;在另一种害虫中,含全长en基因的重组病毒vAc-ph-en对2龄棉铃虫的杀虫活性与对照组差异显著,是对照病毒的9.136倍,而仅含基因膜结合序列en2的重组病毒vAc-ph-en2对2龄棉铃虫的杀虫活性与对照组无显著差异.这一结果预示增效蛋白在两种昆虫中可能有不同的作用途径,在甜菜夜蛾中主要通过膜融合途径增效,而在棉铃虫中,则主要通过酶解途径增效.

摘要： 为表达与纯化具有天然构象的施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)核衣壳蛋白(N),本研究在SBV-N蛋白编码基因的N端加入6个组氨酸(6×His)标签,将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBacTM-1中;经过测序鉴定后,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞中,经过同源重组获得重组杆粒Bacmid-His-SBV-N,将其转染Sf9昆虫细胞制备表达His-SBV-N融合蛋白的重组杆状病毒;将重组杆状病毒传代扩增后,利用Ni-NTA琼脂糖在非变性条件下纯化His-SBV-N融合蛋白,并对纯化产物进行SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果表明,在相对分子质量约为26ku处出现目的蛋白条带,其大小与His-SBV-N融合蛋白相符;该蛋白与抗His标签的单抗和抗SBV-N蛋白的单抗2C8均可以发生特异性反应,说明该蛋白具有良好的反应原性.重组His-SBV-N融合蛋白的成功制备,为施马伦贝格病血清学检测方法的建立提供了生物材料.

摘要： 为获得具有生物活性的牛疱疹病毒1型(BHV-1)病毒囊膜糖蛋白gE,采用PCR方法从BHV-1感染的牛肾细胞全基因组中扩增出约1.5 kb的gE基因片段,再将gE基因克隆到新型杆状病毒载体pFastBac-L1C-Bse中,构建重组转移质粒pFB-gE.将pFB-gE转化到杆状病毒基因组的DH 10Bac感受态细胞中,制备重组杆粒rBacmid-gE.将该重组杆粒的DNAE转染昆虫细胞Sf9,获得与gE基因发生重组的杆状病毒.Westem blot及间接免疫荧光试验(IFA)分析结果显示,重组杆状病毒在SF9中表达了分子量大小约为43 ku的gE融合蛋白,该融合蛋白分别与鼠抗His标签单克隆抗体和鼠抗BHV-1多克隆抗体发生特异性结合,表明获得的gE融合蛋白具有良好的免疫反应性.本研究为进一步获得高特异性的诊断抗原奠定基础.

摘要： 猪繁殖与呼吸障碍综合征是由PRRSV引起的一种高度接触性传染病,是危害全世界生猪养殖业的重要疫病之一.PRRSV侵入宿主细胞,需要与细胞膜表面特异性受体结合,利用细胞内吞作用感染细胞,受体是病毒侵入的首要门户.rn 本研究利用两种系统分别设计了针对NMHCⅡ-A基因的TALEN载体和在杆状病毒表达系统表达的CRISPR-Cas9载体，测序结果表明工程核酸酶均构建正确。rn Western blot结果显示工程核酸酶可以在Sf9细胞系中有效表达。将靶标序列克隆至SSA检测载体上，利用双荧光素酶系统检测工程核酸酶的体外切割活性。通过对PRRSV感染基因编辑细胞系的感染力研究，并结合NMHCⅡ-A的基因功能鉴定NMHCⅡ-A基因编辑细胞系的基本特性，有助于了解PRRSV侵入过程，从而为阐明PRRSV和NMHCⅡ-A之间相互作用的依赖性方式提供依据。rn 利用Golden Gate的方法可以高效组装含有大量重复序列的TALEN的表达载体。AcMuttiBac杆状病毒表达系统能够使工程核酸酶得到高效的表达。双荧光素酶报告载体检测可以有效验证工程核酸酶的切割效率为进一步的基因编辑奠定基础。

摘要： 甲流可造成大规模流行的人畜共患急性呼吸道传染病,是长期以来威胁人畜健康的重要传染病之一,影响了社会稳定和造成严重的经济损失.目前接种疫苗是防控流感最有效的措施,使用的流感疫苗主要是甲型流感病毒的H1N1亚型和H3N2亚型以及乙型流感病毒的三联灭活疫苗,且主要针对流感病毒的HA和NA.当前流感疫苗应对流感大爆发时有一定的局限性.因此,研制更为安全、高效的新型疫苗迫在眉睫,VLPs疫苗是比较有发展前景的疫苗策略之一.IFA检测结果显示:rBac-M1-M2、rBac-M1-NA及rBac-M1-HA感染的Sf9昆虫细胞，在与特定抗体反应时，均检测到明显的黄绿色荧光，而无外源基因插人的rBac-NC感染的细胞中未检测到荧光;Western-blot检测结果显示:rBac-M1-M2、rBac-M1-NA及rBac-M1-HA感染的Sf9昆虫细胞上清中未能检测到特异性印迹，细胞沉淀样品在与特定抗体反应时，均检测到特异性印迹，rBac-NC感染的细胞中亦未检测到特异性印迹。以上结果表明:双基因重组杆状病毒rBac-M1-M2、rBac-M1-NA及rBac-M1-HA中的外源基因在Sf9昆虫细胞中成功表达。综上所述，本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统，成功构建了共表达甲型流感病毒双基因的重组杆状病毒rBac-M1-M2 , rBac-M1-NA及rBac-M1-HA，为研究流感病毒VLP的形成机制以及研发新型流感疫苗提供了一些思路。

摘要： 通过PCR方法扩增完整的Cap基因，按正确的阅读框架将其克隆入pFastBacTM HTB杆状病毒载体中，将筛选的阳性重组载体pF-CP，转化至含有杆状病毒穿梭载体和辅助载体的DH10Bac大肠杆菌感受态细胞中，经过蓝白斑筛选和PCR鉴定，获得重组表达载体rBacmid-CP。在脂质体的介导下转染Sf9昆虫细胞，72h后获得重组杆状病毒。Westemblot和间接免疫荧光(IFA)试验结果表明，本研究成功构建了表达鸭圆环病毒Cap蛋白的重组杆状病毒，表达的蛋白与原核表达Cap蛋白免疫小鼠采集的血清具有良好的反应原性，为进一步研究C印蛋白的功能奠定了基础。

摘要： 为了研究家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus，mNPV）中gp41和Da26蛋白的功能，从BmNPV的基因组中克隆了gp41和Da26基因。克隆到杆状病毒转座载体pFastBac-GFP中，构建成重组转座载体pFastBac-GFP-gp41和pFastBac-GFP-Da26，利用杆状病毒表达系统（Bac-to-Bac）筛选重组杆状病毒，在家蚕细胞BmN中进行了表达。

摘要： 为了研究重组杆状病毒杀虫剂对家蚕的影响，将东亚钳蝎毒素BmKT基因和AcN PV的polh基因克隆到杆状病毒转座载体pFastBacHTB中，构建成重组转座载体pFast-BmK-Ph,利用杆状病毒表达系统（Bac-to-Bac）得到含多角体蛋白并可表达蝎毒素的重组病毒rAcNPV。

摘要： 根据GenBank上shiva-la的成熟肽基因序列，人工合成shiva-la基因并加入6×His标签。将shiva-1a基因克隆到杆状病毒转座载体pBacFast-Dual中，筛选重组质粒，转化大肠杆菌DH10OBas感受态细胞，经过蓝白斑筛选得到重组杆状病毒DNA，以脂质体介导法转染Sf9昆虫细胞，待细胞出现病变后，收集上清液从而获得重组杆状病毒。用此杆状病毒感染的Sf9细胞，Western Blot检测出分子量约5ku的shiva-1a多肽，与预期结果大小一致。体外抑菌试验证明，表达的shiva-1a多肽对大肠埃希氏菌(DE3菌株)具有抑菌活性。

摘要： 本发明提供了含有猪伪狂犬病病毒gD蛋白基因的重组杆状病毒转移载体、重组杆状病毒及其制备方法和应用，属于兽用疫苗技术领域。含有猪伪狂犬病病毒gD蛋白基因的重组杆状病毒转移载体，以HBM信号肽‑gD‑His标签或HBM信号肽‑gD‑IgGFc‑His标签为外源基因分别插入杆状病毒转移载体的BamHI与EcoRI之间的酶切位点处和SpeI和HindIII之间酶切位点处；所述gD为编码跨膜区片段缺失的gD蛋白的基因。所述载体促进猪伪狂犬病病毒gD蛋白和gD‑IgGFc融合蛋白的分泌表达。采用gD蛋白和gD‑IgGFc融合蛋白制备亚单位疫苗，具有安全性好、特异性强、攻毒保护率高的特点。

摘要： 本发明提供了含有猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体、重组杆状病毒及其制备方法和应用，属于兽用疫苗技术领域。含有猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体，以GP67信号肽‑gB‑His标签或GP67信号肽‑gB‑IgGFc‑His标签为外源基因分别插入杆状病毒转移载体的BamHI与EcoRI之间的酶切位点处和XbaI与HindIII之间酶切位点处；所述gB为编码C端跨膜区片段缺失的gB蛋白的基因。所述载体促进猪伪狂犬病病毒gB蛋白和gB‑IgGFc融合蛋白的分泌表达。采用gB蛋白和gB‑IgGFc融合蛋白制备单亚基疫苗，具有安全性好、特异性强、攻毒保护率高的特点。

摘要： 本发明提供了含有猪伪狂犬病病毒gD蛋白基因的重组杆状病毒转移载体、重组杆状病毒及其制备方法和应用，属于兽用疫苗技术领域。含有猪伪狂犬病病毒gD蛋白基因的重组杆状病毒转移载体，以HBM信号肽‑gD‑His标签或HBM信号肽‑gD‑IgGFc‑His标签为外源基因分别插入杆状病毒转移载体的BamHI与EcoRI之间的酶切位点处和SpeI和HindIII之间酶切位点处；所述gD为编码跨膜区片段缺失的gD蛋白的基因。所述载体促进猪伪狂犬病病毒gD蛋白和gD‑IgGFc融合蛋白的分泌表达。采用gD蛋白和gD‑IgGFc融合蛋白制备亚单位疫苗，具有安全性好、特异性强、攻毒保护率高的特点。

摘要： 本发明提供了含有猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体、重组杆状病毒及其制备方法和应用，属于兽用疫苗技术领域。含有猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体，以GP67信号肽‑gB‑His标签或GP67信号肽‑gB‑IgGFc‑His标签为外源基因分别插入杆状病毒转移载体的BamHI与EcoRI之间的酶切位点处和XbaI与HindIII之间酶切位点处；所述gB为编码C端跨膜区片段缺失的gB蛋白的基因。所述载体促进猪伪狂犬病病毒gB蛋白和gB‑IgGFc融合蛋白的分泌表达。采用gB蛋白和gB‑IgGFc融合蛋白制备单亚基疫苗，具有安全性好、特异性强、攻毒保护率高的特点。

摘要： 本发明属于兽用生物制品技术领域，尤其涉及一种杆状病毒表达系统制备牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的方法及应用。将BVDV‑LC株E2基因连接至pFastBac1重组杆状病毒转移载体，在大肠杆菌中通过同源重组获得重组杆状病毒载体rBacmid‑E2，转染Sf9昆虫细胞后获得第一代重组杆状病毒P1，将P1代病毒继续感染Sf9昆虫细胞获得感染能力高的第二代重组杆状病毒P2，再将P2代病毒扩大培养后纯化得到E2蛋白。将本发明制备的E2蛋白作为诊断抗原和亚单位疫苗，能够表现出更好的优势，可以作为候选抗原进行疫苗和ELISA试剂盒的开发。

摘要： 本发明涉及抗原蛋白表达技术，具体涉及基于杆状病毒表达系统制备包裹鲤疱疹病毒II型抗原的多角体的方法，通过设计重组家蚕核型多角体病毒BmNPV‑VP3‑cyHV‑polh，ORF72、ORF66、ORF81和ORF82的1‑186、993‑1197、603‑783、85‑186区域序列与家蚕质型多角体病毒结构蛋白VP3基因1‑279区域的编码序列串联融合序列由杆状病毒P10启动子控制；家蚕质型多角体蛋白基因由杆状病毒的多角体蛋白基因启动子控制。用该病毒接种家蚕或家蚕培养细胞，重组病毒表达的鲤疱疹病毒II型的抗原蛋白可包裹进家蚕质型多角体内。形成的多角体可以通过简单的差速离心实现纯化；纯化的多角体在碱性条件下裂解后，可以通过离心使多角体蛋白沉淀，而鲤疱疹病毒II型抗原留存在上清中，从而可以快速、方便地获得鲤疱疹病毒II型抗原。

摘要： 本发明公开一种杆状病毒表达系统中杆状病毒的灭活方法，包括在杆状病毒表达系统表达的含有目的产物的收获液中加入灭活剂的步骤；所述灭活剂由去污剂和有机溶剂组成，其中所述去污剂占所述收获液和灭活剂的总体积的0.5‑5％，所述有机溶剂占所述收获液和灭活剂的总体积的0.15‑1.5％，优选所述去污剂与所述有机溶剂二者的体积比为1:0.3。本发明的方法能对杆状病毒表达系统中的杆状病毒进行有效灭活，同时又能保持杆状病毒表达系统生产出的AAV病毒和重组蛋白的活性，为杆状病毒表达系统生产的AAV和重组蛋白的安全性提供新的保障。

摘要： 本发明属于兽用生物制品技术领域，尤其涉及一种杆状病毒表达系统制备牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的方法及应用。将BVDV‑LC株E2基因连接至pFastBac1重组杆状病毒转移载体，在大肠杆菌中通过同源重组获得重组杆状病毒载体rBacmid‑E2，转染Sf9昆虫细胞后获得第一代重组杆状病毒P1，将P1代病毒继续感染Sf9昆虫细胞获得感染能力高的第二代重组杆状病毒P2，再将P2代病毒扩大培养后纯化得到E2蛋白。将本发明制备的E2蛋白作为诊断抗原和亚单位疫苗，能够表现出更好的优势，可以作为候选抗原进行疫苗和ELISA试剂盒的开发。

摘要： 本发明公开了Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在制备家蚕microRNA超量表达系统中的应用，家蚕microRNA超量表达系统含有重组pFastBac1载体，重组pFastBac1载体由pFastBac1载体多克隆酶切位点处依次插入红色荧光蛋白编码基因和表达家蚕microRNA的次级前体序列而得，本发明利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统作为家蚕microRNA超量表达系统能够在家蚕细胞和个体水平均实现超量表达家蚕簇microRNAs，为家蚕miRNA的功能研究提供了新的工具。

摘要： 本发明属于微生物技术领域，旨在提供一种利用杆状病毒表达系统制备猪流行腹泻病毒S1蛋白的方法。包括以下步骤：PEDV的S1基因克隆和密码子的优化；构建PEDV‑S1基因重组杆状病毒表达载体；表达重组PEDV‑S1蛋白的杆状病毒包装和传代；优化表达重组PEDV‑S1蛋白的病毒在sf9细胞表达条件；纯化重组PEDV‑S1蛋白。本发明安全性较高，不存在PEDV弱毒返强的风险；具有天然构象，具有较好的模拟PEDV病毒的免疫原作用；高滴度的免疫原，方便注射或者口服给药。