利用反向PCR方法扩增细菌热激蛋白HSP60基因

摘要

利用PCR简并引物扩增出HSP60基因中一段约600bp的核心片段,将该核心片段标记为探针.与基因组DNA进行Southern杂交,选择出适宜的限制性内切酶,以便消化基因组DNA得到大小合适的、含有HSP60基因的酶切片段.将酶切片段自身环化后作为模板进行反向PCR引物的延伸方向自核心片段出发延环化分子向未知序列区进行,可扩增出核心区上下游的序列.应用该方法,扩增并测定了寓齿双歧杆菌( Bifidobacterium denticolens )DSM10105]、奇异双歧杆菌( Bifidobacterium inopinatum ) DSM10107T和阴道加德纳氏菌nerella vaginalis ) ATCC14018T的HSP60全基因序列及青春双歧杆菌( Bifidobacterium adolescentis )JCM1275T98%以上的HSP60全基因序列.结果表明,反向PCR方法可有效的扩增细菌HSP60基因.