利用Tn5-1063转座诱变法分离苜蓿中华根瘤菌042BM noeB基因的研究

摘要

采用三亲本杂交方法将带有Tn5-1063(含luxAB)的质粒pRL1063a导入苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)042BM,进行转座子插入诱变,在含有氯霉素、卡那霉素的TY平板上筛选接合子.通过结瘤试验,从1000个突变株中,筛选到3个结瘤突变株042BMR5、042BMR11和 042BRM29.它们都表现出发光酶活性,表明转座子正向插入到基因组中的某个启动子下游.Southern杂交结果证实,转座子均为单一位点插入.对042BMR5突变株基因组进行反向PCR,扩增位于Tn5-1063两端的侧翼序列.测序结果表明,转座子插入到苜蓿中华根瘤菌的共生质粒pSymA noeB基因内.根据基因组中noeB上游和下游序列扩增出042BM noeB,其与苜蓿中华根瘤菌1021 noeB的同源性为98%,而与NoeB蛋白的氨基酸序列相似性为95%.疏水性分析发现,NoeB是一个跨膜蛋白,在N末端有4个跨膜区,其中包含3个初级螺旋和1个次级螺旋.