重组炭疽水肿因子的表达与生物活性分析

摘要

炭疽毒素包括3种蛋白因子,即保护性抗原(PA)、致死因子(LF)和水肿因子(EF).EF是钙调蛋白依耐的腺苷酸环化酶,可使细胞cAMP浓度升高,导致宿主防御能力下降.为深入研究炭疽毒素的作用机理,构建了原核表达质粒,在大肠杆菌中表达出重组EF(rEF).经鉴定,rEF以可溶形式表达于细菌胞质中.经过金属螯和层析、阳离子交换层析和凝胶层析,每升诱导培养物可获得约5mg重组蛋白.用重组蛋白免疫家兔获得了兔多抗,能够在细胞试验中中和rEF,体外细胞试验显示rEF具有很好的生物活性,在J774A.1和CHO细胞试验中,能与LF共同竞争和PA的结合位点,相互抑制.上述工作为深入研究炭疽毒素的作用机理,开发针对EF的毒素抑制剂打下基础.