嗜水气单胞菌若干毒力因子同时缺失的突变株的构建及特性分析

摘要

以携带质粒pAM120(Tcr/Tn916)的大肠杆菌CG120株为供体菌,采用滤膜接合法与受体菌嗜水气单胞菌J-1株(cfzr) 进行接合转移,在含Tc和cfz选择平板上进行筛选.共获接合转移菌落3800个,其接合频率为3×10-5(按供体细胞计算).任取38个接合子,提取基因组DNA,以嗜水气单胞菌特异性16S rDNA引物进行 PCR扩增,所有接合子均阳性.为证明Tn916确实插入基因组,以四环素基因(tet)引物进行PCR扩增,结果所有抗性接合子均扩增出一条特异条带.与亲本J-1株相比,所有接合子的主要毒力因子如蛋白酶、溶血素、DNA酶和淀粉酶等均不表达,对小鼠失去致病力,其LD50大于109CFU.接合子连传10次后,四环素抗性消失,但毒力未恢复,说明通过转座子Tn916的插入可获得稳定的无毒嗜水气单胞菌突变株.Tn916引起嗜水气单胞菌毒力性状改变的机制有待研究,推测可能与该菌染色体上存在Tn916的热点或毒力岛有关.