农杆菌介导的灰葡萄孢T-DNA插入突变体库构建及插入位点分析

摘要

[目的]利用农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法对灰葡萄孢(Botrytis cinerea)进行转化,构建T-DNA插入突变体库,为从分子水平上认识灰葡萄孢的致病机制打下基础.[方法]以含有pCAMBIAl390双元载体的农杆菌对灰葡萄孢进行转化,利用潮霉素进行筛选.对抗性稳定的转化子进行生物学和形态学观察,采用离体番茄叶片进行致病性测定.利用TAIL-PCR技术对突变体中T-DNA的旁侧序列进行克隆.[结果]得到了一些突变体,表现为生长速率减缓、产孢能力下降、致病力减弱等.克隆并分析了其中一个突变体中T-DNA插入的位置和旁侧序列.[结论]本实验建立了农杆菌介导的灰葡萄孢转化体系,构建了T-DNA插入的灰葡萄孢突变体库.用TAIL-PCR进行突变体中T-DNA旁侧序列的分析是可行的.