表达T~+Pm保护性抗原的重组猪霍乱沙门氏菌C500株的构建及其生物学特性

摘要

[目的]本研究利用Asd~+平衡致死系统构建表达巴氏杆菌毒素(Pasteurella multocida toxin,PMT)的重组猪霍乱沙门氏菌株,并对重组菌株的生物学特性进行比较研究.[方法和结果]通过基因克隆的方法构建表达PMT的重组质粒pYA-PmtC,再将其电转化减毒猪霍乱沙门氏菌C500的asd基因缺失株C501,构建口服活疫苗菌株C501(pYA-PmtC).研究结果表明重组菌株C501(pYA-PmtC)的生化特性、血清型和生长速度与亲本菌株C500一致;在没有选择压力的条件下,C501(pYA-PmtC)能够稳定遗传重组质粒及其外源基因片段,并能稳定、高效、分泌性表达30.5 kDa的外源保护性抗原rPmtC.C501(pYA-PmtC)腹腔感染BALB/c小鼠的LD_(50)为8.5×10~6CFU,毒力稍低于C500(LD_(50)为4.4×10~6 CFU);口服接种C501(pYA-PmtC)和C500的所有仔猪未见任何发病症状,两者没有显著差别.[结论]本研究利用Asd~+平衡致死系统的原理构建表达T~+Pm保护性抗原重组猪霍乱沙门氏菌弱毒菌株C501(pYA-PmtC),为进一步开发猪萎缩性鼻炎-副伤寒的双价基因工程疫苗奠定基础.