空肠弯曲菌细胞致死性肿胀毒素单克隆抗体的制备与鉴定

摘要

[目的]原核表达空肠弯曲菌细胞致死性肿胀毒素B蛋白(CdtB),制备其单克隆抗体(mAb),并研究mAb抗毒性作用.[方法]扩增空肠弯曲菌cdtB基因并将其构建到pET-30a(+)和pGEX-6p-1表达载体,以原核表达的GST-CdtB蛋白为免疫原,应用杂交瘤技术进行细胞融合;采用间接ELISA方法测定细胞上清和mAb腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析mAb特异性,并以CaCo-2和HD-11细胞为模型,鉴定mAb抗毒性能力.[结果]成功构建重组原核表达质粒pET-30a(+)-cdtB和pGEX-6p-1-cdtB,并融合表达rHis-CdtB和rGST-CdtB蛋白.获得5株稳定分泌CdtB抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1F3,1 F5,2E4,2E11,2F2.抗体Ig类和亚类检测显示2E11 Ig亚类为IgG2b,其他4株均为IgG1.抗体效价高达1∶(1 ×108).Dot-ELISA试验表明5株mAb均能与空肠弯曲菌标准株发生特异性反应,与非空肠弯曲菌呈阴性反应;Western blot法分析表明5株mAb均能与纯化蛋白rGST-CdtB有良好的反应性.基于CaCo-2细胞的黏附和侵袭实验表明mAb能显著降低细菌的黏附和侵袭能力(P＜0.01).[结论]成功制备了针对空肠弯曲菌CdtB蛋白的mAb.为进一步研究空肠弯曲菌致病机制,以及为研制治疗性类药物奠定了基础.