猪链球菌2型Ⅳ型分泌系统组分VirD4与毒力相关性分析

摘要

[目的]构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33毒力岛89 K上的Ⅳ型分泌系统组分VirD4敲除突变株,初步分析其活性和毒力,为进一步研究猪链球菌2型在逃避宿主天然免疫杀伤中的作用提供基础.[方法]以05ZYH33基因组为模板,PCR扩增VirD4基因上下游同源臂,以穿梭质粒pSET1为模板,PCR扩增氯霉素抗性基因Cm,通过重叠PCR技术搭建上述3个片段并连接至温敏载体pSET4s,构建基因敲除载体pSET4s∷VirD4;通过同源重组构建基因敲除突变株△VirD4;通过体外全血杀伤实验、CD1小鼠竞争感染及攻毒实验对突变株和野生株的毒力进行比较分析.[结果]获得了基因敲除突变株△VirD4,通过对比发现其毒力与野生株相比有所降低.[结论]猪链球菌2型Ⅳ型分泌系统组分VirD4与其毒力相关,并在早期抵抗天然免疫细胞杀伤中发挥一定作用.