光滑球拟酵母中AMP代谢对其生理功能的影响

摘要

[目的]研究光滑球拟酵母(Candida glabrata)中AMP代谢影响其碳流代谢和耐酸胁迫的生理机制. [方法]同源重组法敲除基因cgadel2 (ORF CAGLOK05027g)和cgadel 3(ORF CAGLOB02794g)构建双缺菌株cgade12Δade13Δ,与出发菌株(ATCC55)比较ATP水平、碳流代谢酶活性和中间代谢物含量变化分析和AMP代谢对其碳流代谢的影响,对比菌株有机酸胁迫下生长情况及胞内环境变化,研究AMP代谢变化对光滑球拟酵母酸胁迫耐受性的影响.[结果]与出发菌株ATCC55相比,cgade 12Δ ade 13Δ的ATP水平下降了12.50％.与ATCC55相比,cgade12Δade13Δ中柠檬酸合成酶、苹果酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、α-酮戊二酸脱氢酶的活性分别上升了31.26％、19.45％、28.96％、18.36％,柠檬酸、α[-酮戊二酸、苹果酸、琥珀酸含量分别提高了44.11％、73.60％、50.00％、65.68％.胞内丙酮酸浓度下降20.00％,丙酮酸产量下降73.11％.与ATCC55相比,cgadel2Δadel3Δ在0.4％丙酮酸、0.6％苹果酸和0.2％乙酸胁迫下的菌体浓度分别提高了8.71％、11.21％和12.71％.在0.2％乙酸胁迫下,菌株cgade12Δade13Δ的H+-ATPase活性、细胞膜完整度、细胞膜电势分别比出发菌株ATCC55上升了7.04％、8.71％、25.14％,ROS水平下降了19.51％.[结论]基因cgadel2、cgade 13的缺失导致菌株的ATP水平下降,TCA循环活性和有机酸耐受性上升.