荧光蛋白标签对gD囊膜蛋白在BHK-21细胞亚细胞定位的影响

摘要

[目的]探究荧光蛋白标签对马疱疹病毒I型(Equine herpes virus type 1,EHV-l) gD囊膜蛋白亚细胞定位的影响.[方法]以EHV-1基因组为模板利用PCR扩增gD全基因,分别克隆至pAcGFPl-C1和pDsRed2-N1质粒,构建pAc-GFP-gD (GFP-gD)和pDs-gD-Red (gD-Red)重组质粒;将GFP基因插入gD基因信号肽序列之后并克隆至PVAX-1质粒,构建PVAX-S-GFP-gD'(S-GFP-gD')重组质粒;将Flag标签序列与gD囊膜蛋白N端序列融合后并克隆至pVAX-1表达载体,构建pVAX-Flag-gD (Flag-gD)重组质粒.将4种不同重组真核表达质粒分别转染BHK-21细胞,通过激光共聚焦显微镜对不同融合蛋白gD进行亚细胞定位.[结果]成功构建4种不同的融合蛋白gD真核表达载体;在BHK-21细胞单独表达时,不同融合蛋白gD绝大部分都定位于高尔基体,极少量定位于细胞核内.[结论]不同插入位点的荧光蛋白标签对gD囊膜蛋白亚细胞定位无明显影响,这对今后研究其它蛋白亚细胞定位提供参考.