E75、R78和D82是影响大肠埃希氏菌FtsZ自身组装及其与MreB相互作用的重要氨基酸

摘要

[目的]探索大肠埃希氏菌Escherichia coli FtsZ突变体FtsZE75A、FtsZR78G和FtsZD82A对FtsZ自身组装和FtsZ-MreB相互作用的影响.[方法]利用常规分子克隆和定点突变技术,构建FtsZ及其突变体表达载体,亲和纯化得到相应的目标蛋白;通过同源重组构建QN6(ftsZ∷yfp-cat)、QN7(ftsZE75A∷yfp-cat)、QN8ftsZR78G∷yfp-cat)和QN9(ftsZD82A∷yfp-cat)菌株;利用活细胞成像技术观察FtsZ及其突变体的胞内定位模式;免疫沉淀和细菌双杂交实验检测FtsZ/FtsZ*-FtsZ*或FtsZ/FtsZ*-MreB间的相互作用;光扫描检测定点突变对FtsZ组装特性的影响.[结果]FtsZE75A、FtsZR78G和FtsZD82A突变体的功能活性降低、各突变体在Ecoli内不能正确的定位和形成功能性Z环;FtsZ/FtsZ*-FtsZ*单体间的相互作用减弱或消失,FtsZ*-MreB相互作用破坏;FtsZ突变体体外聚合效率降低.[结论]FtsZ E75、R78和D82是影响FtsZ正确组装和功能及FtsZ-MreB相互作用的重要氨基酸.