灰黄青霉Pa-pex11基因对青霉素产生的影响

摘要

【目的】研究灰黄青霉Pa-pex11对青霉素产生的影响。【方法】通过保守序列设计引物从灰黄青霉中克隆了含有pex11同源基因DNA片段,进而通过热不对称交错PCR(Thermal asymmetric interlacedPCR,TailPCR)扩增得到灰黄青霉中Pa-pex11基因的全序列。利用根癌农杆菌介导的遗传转化(ATMT)系统,在灰黄青霉基因组上导入额外的Pa-pex11基因。对灰黄青霉野生型菌株和转化子进行了青霉素发酵及生物活性测定。通过荧光定量PCR(quantitative PCR)对转化子中的Pa-pex11拷贝数进行了相对定量。同时通过透射电镜观察了菌体中微体数量的变化。【结果】实现了灰黄青霉根癌农杆菌介导的遗传转化,获得了在灰黄青霉基因组上插入额外Pa-pex11基因的转化子,在转化子中青霉素产量较野生型菌株提高了1.7倍,电镜照片显示转化子中微体数量明显增加。【结论】通过在基因组中增加Pa-pex11拷贝数能有效地增加灰黄青霉微体的数量,进而提高青霉素的产量。