大鼠骨髓间充质干细胞特异性核酸适配子的筛选和鉴定

摘要

目的 利用指数富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选与大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)特异性结合的核酸适配子,并对核酸适配子与大鼠BMSCs的结合方式及能力进行鉴定.方法 利用SELEX技术,以分离获取的大鼠BMSCs为靶点,从构建的核酸文库中最大程度富集与BMSCs特异性结合的核酸序列,流式细胞术检测文库富集的特异程度,荧光共聚焦实验观察文库与BM SCs的结合能力.对富集程度最高的文库进行克隆、序列测定及序列分析,获得候选适配子.使用RNA structure软件对候选适配子的二级结构进行预测,流式细胞术测定不同浓度候选适配子与BM-SCs结合后的平均荧光强度,使用SigmaPlot软件按公式Y=Bmax X/(X+Kd)获得每个候选适配子与BMSCs的结合曲线及平衡解离常数(Kd).挑选与BMSCs结合力最高的适配子,流式细胞术检测其与不同来源BMSCs的结合能力.结果 流式细胞术与荧光共聚焦实验表明SELEX筛选第9轮文库与BMSCs结合能力最高.经序列分析获得8个大鼠BMSCs特异性候选适配子,均能与BMSCs高亲和力结合,其中适配子apt7的亲和力最高,Kd值为(11.79±0.72)nmol/L.细胞选择性实验表明apt7仅与大鼠来源的BMSCs高亲和力结合,而不能结合小鼠及人来源的BMSCs.结论 通过SELEX技术成功筛选出能高亲和力、高特异性结合大鼠BMSCs的适配子apt7,此方法为BMSCs的鉴定提供了新思路和方法,同时为适配子应用于组织工程支架表面招募循环干细胞提供了实验依据.