血红素氧合酶-1基因真核表达载体的构建及其在血管内皮细胞中的表达

摘要

目的 克隆血红素氧合酶-1(HO-1)基因,并构建真核表达载体,建立重组HO-1蛋白的血管内皮表达细胞系.方法 从大鼠脾脏中提取RNA,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR),克隆到鼠的HO-1基因,并对该基因片段进行T载体克隆、酶切鉴定和测序分析.将HO-1基因插入到真核表达载体pcDNA3中,利用脂质体介导将重组质粒转染血管内皮细胞ECV304细胞,经G418加压筛选后,对细胞进行间接免疫荧光和Western blot分析.结果 DNA测序分析表明克隆的HO-1基因与文献报道一致,酶切鉴定证实基因正确地插入表达载体中.经间接免疫荧光和Westernblot表明重组HO-1蛋白在ECV304细胞中获得高效表达,其分子量约为32 kD.结论 HO-1基因真核表达载体的成功构建和重组HO-1蛋白在血管内皮细胞系中的高效表达,为进一步研究其生物学功能奠定了基础.