目的研究极度低氧下人肝癌细胞株HepG2中凋亡抑制蛋白2(IAP-2)表达的变化,初步探讨其与缺氧诱导因子1(HIF-1)的相关性.方法 HepG2细胞株分组孵育,用免疫细胞化学定性检测IAP-2蛋白,再用Western blot半定量检测IAP-2蛋白变化,同时对比HIF-1蛋白表达;用RT-PCR检测IAP-2基因水平改变.结果免疫细胞化学检测IAP-2蛋白在HepG2细胞中呈阳性表达,定位于胞质.Western blot显示,极度低氧1 h IAP-2蛋白表达明显高于常氧组(t=5.723,P＜0.05),3、5 h IAP-2持续高表达,复氧后恢复基线水平;实验还显示HIF-1和IAP-2的蛋白表达具有差异性:常氧组HIF-1未表达,低氧4 h可诱发,IAP-2保持基线水平;极度低氧HIF-1无变化,IAP-2表达明显增高;复氧后HIF-1不表达,IAP-2恢复基线表达;加入氯化钴后HIF-1恢复表达,IAP-2保持基线.RT-PCR检测表明,极度低氧1 h IAP-2 mRNA表达明显高于常氧组(t=7.097,P＜0.05),3、5 h IAP-2持续高表达,该结果与上述IAP-2蛋白表达具有一致性.结论首次表明极度低氧下IAP-2在人肝癌细胞株HepG2表达上调,并具有独立于HIF 1的抗凋亡机制.
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