表达人CD4分子的逆转录病毒基因转移体系的建立

摘要

目的 构建表达人CD4(hCD4)分子pLXIN-hCD4载体的基因转移体系,使hCD4分子在小鼠T淋巴细胞白血病细胞系L615中长久、稳定地表达.方法 将目的基因hCD4亚克隆到真核细胞表达载体pLXIN上,构建重组质粒pLXIN-hCD4.将该质粒用PloyFect脂质体转染到PT67包装细胞,获得病毒颗粒;用病毒颗粒感染体外培养的小鼠T淋巴细胞白血病细胞系L615.收集筛选后的细胞(L615-hCD4),以抗CD4单抗标记后用流式细胞术(FCM)检测其细胞膜hCD4分子的表达情况.PbFCM法检测L615细胞和L615-hCD4细胞的细胞周期.结果 菌落PCR鉴定及酶切鉴定显示hCD4基因成功地插入pLXIN载体中;hCD4分子可在L615-hCD4细胞膜表面稳定表达,而野生型L615细胞膜 表面无hCD4分子表达.L615-hCD4与野生型L615的细胞周期比较无差异.结论 成功构建了能在真核细胞上表达hCD4分子的重组质粒pLXIN-hCD4.L615-hCD4细胞能长期稳定表达hCD4分子,其细胞周期无改变.