人卵巢癌细胞EZH2基因下调对E-钙粘蛋白表达的影响

摘要

目的 探讨果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)与E-钙粘蛋白(E-cadherin)在卵巢癌中的关系.方法 采用短发夹状RNA的真核表达载体稳定转染人卵巢癌细胞C13*,建立稳定沉默EZH2基因的人卵巢癌细胞系shEZH2-C13*,采用Real-time PCR、Western blot和细胞免疫荧光方法检测EZH2下调后E-钙粘蛋白在mRNA水平和蛋白水平表达的变化,了解EZH2对E-钙粘蛋白表达的影响.结果 shEZH2质粒表达载体转染C13*获得的稳定转染细胞株shEZH2-C13*中,相对于未转染组,EZH2的mRNA和蛋白水平分别下降了(67.33±6.43)%和(71.21±5.77)%,差异有统计学意义(均P<0.05).在稳定沉默EZH2的细胞中,E-钙粘蛋白的mRNA水平和蛋白水平相对于未转染组分别升高(52.33±19.03)%和(60.45±3.28)%,差异有统计学意义(均P<0.05).细胞免疫荧光检测结果显示,EZH2沉默的细胞中E-钙粘蛋白表达明显高于未转染组,而空载体转染组没有明显变化.结论 成功构建EZH2 shRNA表达载体,获得EZH2基因稳定沉默的人卵巢癌细胞系shEZH2-C13*,同时发现在卵巢癌细胞中EZH2下调能升高E-钙粘蛋白的表达水平,推测EZH2可能通过催化H3K27三甲基化,介导DNA甲基化或组蛋白甲基化,抑制E-钙粘蛋白转录,进一步触发其下游事件,影响卵巢癌的侵袭和转移.