使用交联剂DMP消除免疫沉淀非特异性条带

摘要

目的 消除免疫沉淀技术中免疫印迹检测到的非特异性条带,排除非特异性条带对研究蛋白质分子相互作用及磷酸化的干扰.方法 检测蛋白交联剂庚二亚氨酸二甲酯(DMP)交联抗体和载体基质的稳定性及交联效果;积极寻找和优化抗原析出条件,分离出免疫沉淀复合物中抗原成分;检测析出抗原特异性条带及磷酸化水平.结果 DMP有效地将抗体共价结合于载体基质,具有较好的稳定性和交联效果,其免疫沉淀中未检测到非特异性蛋白条带;与Laemmli缓冲液相比,甘氨酸可有效地一次性析出免疫沉淀中大部分抗原;经pH值调整后,析出抗原的浓度及磷酸化水平无明显变化.结论 交联剂DMP能有效地消除传统免疫沉淀技术中检测到的非特异性蛋白条带,且能应用于蛋白质磷酸化的检测.