两种荧光探针标记鹿茸提取物的稳定性和生物活性比较研究

摘要

比较两种荧光探针异硫氰酸荧光素FITC和Cy5标记鹿茸提取物PAEs的最佳方法.用FITC和Cy5分别标记PAEs得到标记物FITC-PAEs和Cy5-PAEs;用SDS-PAGE凝胶电泳检测并比较两种荧光染料标记蛋白分子量的差异;用酶标仪检测在特定波长处OD值计算其标记率;用PC12细胞验证两种荧光染料的生物安全性;将荧光标记物分别与人工胃液和人工肠液共孵育,观察它们在其中的稳定性.结果表明,两种荧光染料标记PAEs蛋白分子量并无明显差异,但FITC-PAEs荧光强度稍强.通过计算标记率表明两种荧光染料均可充分标记PAEs,但Cy5价格昂贵.相比于FITC-PAEs,Cy5-PAEs在人工胃液和人工肠液中稳定性较差.因此,我们选择标记率高,在人工胃液和人工肠液中较为稳定且对机体无毒副作用,价格合理的FITC荧光染料标记PAEs并用于后续实验研究.这为建立蛋白类中药大分子的活性示踪方法,开发口服蛋白类药物奠定基础.