对生玉米幼叶尿卟啉原脱羧酶的纯化及部分性质研究

摘要

尿卟啉原Ⅲ脱羧酶是植物血红素和叶绿素合成的一个关键调控酶.对生玉米叶片中叶绿素含量较比互生玉米高.对生玉米幼苗经硫酸铵分级沉淀,DEAE Sepharose CL-6B、Sephacryl S-200、羟基磷灰石和BlueSepharose CL-6B层析,纯化了尿卟啉原脱羧酶.纯化倍数为1 060倍,得率约8%,比活约880 U/mg蛋白.纯化的UROD在SDS/PAGE显示一条带,亚基分子量约为40 kD,Sephacryl S-300测得全酶分子量约为55kD.IEF-PAGE显示UROD为一条带,等电点约为6.0,酶的最适pH值约7.0,在55℃下保温12 min,酶活力丧失90%,在100 mmol/L的巯基乙醇下,UROD的酶活力提高7倍.体外5 mmol/L的磷酸吡哆醛修饰显示UROD活力下降约30%.