对虾白斑综合症病毒重组cDNA克隆的构建与分析

摘要

取经人工注射感染了对虾白斑综合症病毒40-45h的凡纳对虾鳃组织,分离mRNA,以mRNA为模板合成双链cDNA,并克隆于PUC质粒的Not I/Sal I位点,构建了1000余株对虾感染后期鳃细胞的重组cDNA克隆.重组质粒经PCR鉴定插入片段,DNA斑点杂交分析目的片段,测定了20株对虾白斑综合症病毒的重组cDNA克隆的末端DNA序列,并对其进行了包含存在的开放阅读框架、启动区上游序列、编码产物的特性等分析.结果显示:PCR产物在0.3-1.6kb之间;大于1kb的克隆中有31.8%的克隆为白斑综合症病毒的重组cDNA克隆.已测序的不包含同源序列的13株克隆中含有14个开放阅读框,其中11个上游可检出启动子基序,4个可检出启动子调制元件.ORF转译产物的特性基序分析显示:有2个O RFs可检出锌指基序,3个ORFs可检出亮氨酸拉链基序,2个ORFs可检出NTP结合基序,未检出核定位信号基序.