长角血蜱唾液腺中腺苷三磷酸双磷酸酶的纯化及其酶切机制

摘要

利用染料亲和层析(Cibacorn Blue柱)和离子交换层析(Macrosphere WCX柱)对长角血蜱Haemaphysalis longicornis唾液腺的腺苷三磷酸双磷酸酶进行纯化,经SDS-PAGE证实其分子量为66kD.腺苷三磷酸双磷酸酶可以水解ATP和ADP,但对AMP无水解作用,水解ATP和ADP的Km值均为0.2 μmol/L,Vmax值分别为12.5和15.6 μmool/(min@mg).腺苷三磷酸双磷酸酶水解ATP的中间产物是ADP,最终产物是AMP和正磷酸.表明腺苷三磷酸双磷酸酶水解ATP的位点是5＇-核苷酸的γ-磷酸键,水解ADP的位点是5＇-核苷酸的 B-磷酸键.