玻璃表面cDNA微阵列的制备与优化

摘要

对DNA进行荧光标记,确定简单、实用和有效的固定化方法和筛选出合适的杂交条件,是制备DNA阵列的几个关键步骤.在PCR的过程对cDNA进行标记,不同的掺入比例可以得到不同的标记效率,Cye dye-dCTP/dCTP的比例在1:3～1:4较好.将DNA固定到玻璃表面,poly-l-lysine方法是一种不需要对DNA进行修饰的有效方法.其中UV照射的能量以600mJ效果最好;水合(rehydrate)温浴过程的温度以65°C最佳.在固化过程中所用探针的浓度0.2-0.5mg/ml对杂交信号影响不多,也就是芯片表面固定的探针DNA应选在此范围内.杂交信号与所用的靶DNA的浓度成正相关,且在一定的范围内呈正比例关系.