甜菜夜蛾核多角体病毒在离体细胞中连续传代时重复DNA片段的产生和分析

摘要

野生型甜菜夜蛾核多角体病毒(SeMNPV)US1分离株(SeUS1)通过空斑法纯化, PCR、长片段PCR和限制性内切酶分析筛选和鉴定, 获得一株基因型较为均一且具完整基因组的克隆株, 命名为Se-4.Se-4在其宿主细胞系Se301中无稀释连续传代至10代, 各代被感染细胞中的病毒DNA经限制性内切酶分析, 发现在第7代时病毒基因组中出现了一条新增的3.5 kb片段, 随着代数的增加,该片段的摩尔量逐渐增加, 在第10代时已成为超摩尔带, 推测该片段为SeMNPV DNA 复制的顺式作用元件. 序列分析表明, 该片段覆盖了SeMNPV 81 014～84 538 nt 共3 525 bp 的序列, 包含被预测为杆状病毒的DNA复制原点的non-hr区域以及一些SeMNPV特有的ORF. 研究结果为核多角体病毒II组的non-hr在病毒复制过程中具有重要作用的观点提供了体外实验的证据.