甲型肝炎病毒经人源二倍体细胞连续传代后的遗传特征

摘要

目的:通过将甲肝病毒野毒株H2/w在人源二倍体细胞连续传代,并测定其特定区段的基因序列,了解甲肝病毒的遗传变异特征. 方法:将甲肝病毒野毒H2/w适应到人源二倍体细胞KMB17并在其上连续传代25代,选取其中第5(H2K5)、10(H2K10)、15(H2K15)、20(H2K20)、25(H2K25)代病毒,提取其基因组RNA,通过RT-PCR扩增5'NCR、2A、2C等区段或全长基因组,并直接测定所扩增到的PCR产物的核苷酸序列,其后应用生物信息学软件对所获序列进行同源性比较分析. 结果:甲肝病毒野毒株H2/w适应到人源二倍体细胞KMB17后,其第5代病毒H2/K5在5'NCR(101-200)即发生较大变异,主要表现为128-136位连续缺失9bp,第180-181位插入11bp,而H2/K5、H2/K10、H2/K15、 H2/K20、H2/K25之间在这一区段的同源性高达99％;H2/K5在2A(3011-3110)与原代野毒株H2/w相比大约有8％的差异,而与其他测定的子代病毒在该区段的同源性高达98％;H2/K5在2C(3986-4085)与原代野毒株H2/w相比大约有12％的差异,而与其他测定的子代病毒在该区段的同源性高达98％.其中H2/K15、H2/K20与HAV代表株HM175/w、LA、MBB、GBM等的主要抗原位点完全一致. 结论:甲肝病毒在适应人源二倍体细胞的连续传代过程中,其与细胞适应或毒力相关的基因在早期即发生较大变异,其后这些变异可保持相对稳定,其主要抗原位点在连续细胞传代过程中保持不变.