玉米SSIIb蛋白多克隆抗体的制备及其应用

摘要

抗体是蛋白质功能研究的重要试剂。玉米蛋白的功能研究因缺乏相应的抗体而难以开展。玉米淀粉合酶IIb与淀粉合酶IIa均属于淀粉合酶,其主要负责支链淀粉的延伸。但对淀粉合酶IIb的报道较少,本研究以原核表达的淀粉合酶IIb的C端(455~704 aa)GST融合蛋白为抗原,免疫新西兰大白兔,分离血清制备SSIIb多克隆抗体。Western blot试验发现,SSIIb多克隆抗体不但能识别SSIIb-C(455~704 aa)抗原,而且能识别玉米不同发育阶段胚乳中SSIIb蛋白。利用该多克隆抗体的Western blot试验表明,玉米SSIIb蛋白的表达在授粉后10 d到30 d的胚乳中表达模式是先增后降,授粉后15 d表达量最高,而半定量RT-PCR的结果表明授粉后20 d SSIIb的转录水平最高。这些结果表明成功制备了特异的玉米SSIIb的多克隆抗体,并能在Western blot中特异识别玉米内源SSIIb蛋白,为进一步深入研究SSIIb蛋白功能奠定基础。