根癌农杆菌介导获得稗草Ecppc转基因小麦的研究

摘要

采用携带pUbi-Ecppc质粒的3个根癌农杆菌菌株(LBA4404、EHA105和C58c1),对经过预培养10～12 d的春小麦品种扬麦158、Bobwhite和扬麦12的幼胚愈伤组织进行了遗传转化,对筛选中的抗生素浓度、菌液浓度、共培养温度和时间、受体基因型、菌株-质粒组合等影响转化的重要因素进行了研究.首次将单子叶野生C4植物稗草的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(Ecppc)导入不同基因型小麦受体,并得到具有潮霉素(Hyg)抗性的转化植株.从816块共培养愈伤组织中转化得到34株抗性植株,其中14株PCR检测为阳性.扬麦158的转化效率达3.03%.Southern和RT-PCR分析表明,外源基因已整合到小麦基因组并得到正确的转录.生理学检测显示,转基因小麦植株的光合速率和PEPC活性都有所提高.说明Ubiqintin基因启动子控制的稗草PEPC cDNA基因在小麦中可以正确表达和起到一定的生理作用.这些工作为进一步探讨PEPC对小麦光合作用及其他生理过程的影响奠定了基础.