布鲁氏菌核糖体L7/L12蛋白的原核表达及对鼠源树突状细胞的作用

摘要

为了研究和探讨布鲁氏菌核糖体L7/L12蛋白对鼠源树突状细胞(BM-DCs)分化和成熟的影响,用布鲁氏菌S2疫苗株为模板扩增L7/L12基因,构建重组质粒pET30a-L7/L12,用大肠埃希菌原核表达系统进行诱导表达,并用Ni柱对表达的蛋白进行纯化。用IL-4和GM-CSF诱导培养鼠源DCs,用脂多糖(LPS)和L7/L12蛋白刺激DCs后检测其表面共刺激分子和炎症因子的变化。结果表明,重组蛋白在1 mmol·L^(-1)的IPTG、16℃过夜的条件下以可溶性形式高效表达,其大小为18 ku,纯度达到93%以上并有一定的反应原性。流式细胞仪检测被刺激的BM-DCs细胞表面CD40、CD80等抗原分子的表达显著(P<0.05)高于空白对照组。qPCR结果显示,炎性细胞因子TNF-β、IL-1β、IL-12极显著(P<0.01)高于空白对照组。重组L7/L12蛋白具有刺激DCs细胞分化、成熟和促进炎症因子释放的功能。