新型番鸭呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及其抗原特性

摘要

新型番鸭呼肠孤病毒是近年来新发现的一种引起鸭严重疾病的病原,该病毒与经典MDRV主要在病毒宿主范围、体外培养特性、临床致病性和免疫保护特性上存在显著的差异.通过RT-PCR扩增新型呼肠孤病毒σC基因,经Nco Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切处理,插入到pET-28a(+)原核表达载体,获得重组质粒pET-28a(+)-σC.将重组阳性质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达后经SDS-PAGE电泳对σC蛋白进行初步分析,蛋白分子量约为36 kDa.重组蛋白经纯化后免疫实验兔,获得抗σC蛋白的高效免疫血清.通过Western Blot与间接免疫荧光实验初步表明,新型鸭呼肠孤病毒σ-C蛋白具有良好的反应活性.