三疣梭子蟹免疫相关基因Cystatin的鉴定与表达分析

摘要

半胱氨酸蛋白酶抑制剂Cystatin超家族在机体中参与包括免疫调节在内的多种生理病理功能.通过对三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)血细胞全长cDNA文库随机测序,鉴定了一个新颖的Ⅰ型Cystatin基因,命名为PtCystatin.PtCystatin全长cDNA 960 bp,开放阅读框372 bp,编码123个氨基酸残基,N端19个氨基酸残基为信号肽.PtCystatin成熟肽有104个氨基酸残基,理论分子量为11640.30 Da,等电点pI为5.24,有一个Cystatin结构域.PtCystatin与Ⅰ型Cystatin序列同源性高,人Cystatin A与靶酶结合的2个基序在Pt-Cystatin中也保守(M26VPGG30,Q71VVAG75),C端无二硫键.组织表达差异分析显示PtCystatin在胃中表达量高,其次为肝胰脏、鳃、血细胞,肌肉和眼中表达量低.致病菌副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)诱导3h,血细胞PtCystatin表达量小幅上调1.21倍(P＜0.05);而在6h和12 h显著下调,分别为0.47倍(P＜0.01)和0.57倍(P ＜0.05);24 h恢复到诱导前水平,提示PtCystatin可能参与三疣梭子蟹的免疫防御反应,是一个免疫相关基因.