BCAC-EMA-Rti-LAMP非预增菌快速检测鱼肉污染活的副溶血弧菌研究

摘要

[目的]随着人民物质生活水平的不断提高,对食品质量要求也愈来愈高,食品安全现如今已经成为影响人类生命健康财产安全的重大公共卫生问题.食源性致病菌是引起食品安全中毒事件的主要原因,而副溶血弧菌主要污染海产品从而引起急性肠胃炎.因此,快速有效地检测筛查污染的海产品,是有效防控副溶血弧菌食源性疾病暴发的必要条件.[方法]研究以副溶血弧菌特异性tlh基因设计合成引物,以Midori Green为核酸荧光染料,构建了一种副溶血弧菌实时荧光环介导等温扩增(Rti-LAMP)检测技术,并联合蒙脱石封闭的活性炭(BCAC)、叠氮溴化乙锭(EMA)对样品前处理,建立了一种非预增菌快速检测鱼肉污染活的副溶血弧菌方法.[结果]Rti-LAMP检测纯培养副溶血弧菌灵敏度达1 CFU/反应,1 h以内完成.模拟污染1 g鱼肉样品,经4 g BCAC吸附和6μg/mL EMA终浓度处理细菌样品,提取细菌DNA用于Rti-LAMP扩增反应,最低检出限为6 CFU/g活的副溶血弧菌,整个检测过程需约5 h.对市售33份新鲜海鱼样品检测,BCAC-EMA-Rti-LAMP检测出3份阳性样品,BCAC-Rti-LAMP为6份阳性样品,而相应国标检测法为2份阳性样品.[结论]研究表明,BCAC-EMA-Rti-LAMP可以有效检测区分样品中活的副溶血弧菌污染,较国标检测法更快速、灵敏,有望作为鱼肉副溶血弧菌污染的一种快速筛查检测方法.