猪垂体总cDNA的合成和编码猪生长激素成熟肽DNA序列的PCR扩增

摘要

以猪垂体ｍＲＮＡ为模板，Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）（１２～１８）为反转录引物，在ＡＭＶ－ＲＴ的催化下，先合成ｃＤＮＡ第一链，再以ＲＮａｓｅＨ降解的ｍＲＮＡ小分子为引物、ｓｓ－ｃＤＮＡ为模板，在Ｅ．ｃｏｌｔＤＮＡＰｏｌ．Ｉ的催化下合成ｃＤＮＡ第二链，并用Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡｌｉｇａｓｅ连接缺口和Ｔ４ＤＮＡＰｏｌ补齐末端，以获得长度完整的ｄｓ－ＣＤＮＡ分子。根据已知的ｐＧＨ基因序列，设计并合成了一对特异引物分子，以总ｃＤＮＡ为模板，进行ＰＣＲ扩增，分子杂交证明，获得的扩增片段即为侧翼带有重组位点和附加密码的编码ｐＧＨ成熟肽的ＤＮＡ序列。