反转录

摘要： 利用双抗体夹心酶联免疫吸附法分离得到了PLRV宁夏分离物,并采用RT-PCR技术分离得到了宁夏分离物外壳蛋白基因CP的核苷酸序列,PLRV CP基因共624 bp,推测编码208个氨基酸残基,分子量大小为23234.2,等电点11.85.通过同源性分析,其与2013年内蒙古分离物(KC456052)最为接近,同源性达99.8％;进化树分析发现其有一定的地理区域性,为单独分支起源.

摘要： 反转录-环介导等温扩增(reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)技术是以RNA为检测模板的扩增反应.针对金黄色葡萄球菌特异保守nuc基因设计多组引物,通过对引物筛选和反应条件优化,建立了检测金黄色葡萄球菌的实时荧光RT-LAMP方法.利用该方法对菌株特异性、纯培养金黄色葡萄球菌灵敏度和人工污染脱脂乳样品灵敏度进行检测.等温65°C条件下,30 min内完成RT-LAMP反应.该方法具有较强的菌株特异性,对纯培养金黄色葡萄球菌灵敏度检测限为20 fg/μL,在人工污染脱脂乳样品的检测中,灵敏度达到230 CFU/g.建立的实时荧光RT-LAMP方法可以为金黄色葡萄球菌现场快速检测提供有力手段.%In this paper,a reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) method has been developed to detect Staphylococcus aureus.Series of primers were designed according to the specific conservative nuc gene,The optimized primer usage and reaction conditions for Staphylococcus aureus detection using RT-LAMP was established.The specificity and sensitivity of the method was studied using Staphylococcus aureus-contaminated skim milk,and was compared to the reverse transcription polymerase chain (RT-PCR) method in terms of sensitivity.The RT-LAMP assay successfully detected Staphylococcus aureus within 30 minutes at 65 °C.There were 5 out of 26 strains of Staphylococcus aureus detected.The sensitivity of detecting the nucleotide extract of the contaminated skim milk samples was 230 CFU/g,which was 100 fold higher than that of RT-PCR.This RT-LAMP method is a powerful way for rapid detection for Staphylococcus aureus.

摘要： 目的:克隆人乳铁蛋白cDNA基因,进而为重组人乳铁蛋白的制备奠定基础.方法:从人静脉血中性粒细胞中提取得总RNA,RT-PCR法扩增人乳铁蛋白cDNA基因后,将其插入到克隆载体pJET1.2,DNA测序法鉴定基因序列.结果:从人静脉血中性粒细胞中分离获得了总RNA,RT-PCR法克隆了人乳铁蛋白cDNA基因,经过DNA测序分析鉴定,其结果与GeneBank中序列完全一致.结论:成功从人静脉血中性粒细胞中克隆扩增了人乳铁蛋白cDNA基因,为重组人乳铁蛋白的制备奠定基础.

摘要： 诺如病毒是非细菌性腹泻暴发的主要病原之一,对相关检测技术的研究十分必要.本文通过引物、探针、染料的选择,结合适用范围、灵敏度、特异性、重复性的评估对常规反转录-聚合酶链反应、荧光定量RT-PCR、反转录-环介导等温扩增、基因芯片、酶联免疫吸附测定和荧光微球检测条快速检测诺如病毒的技术进行了综述.着重关注了食品和水中诺如病毒检测的病毒富集技术,并提出平衡准确灵敏与简便高效对诺如病毒检测技术的研究具有重要意义.

摘要： Xp11．2转位的肾细胞癌是由Xp11断点导致染色体转位，融合伙伴通常为TFE3，TFE3断裂探针的荧光原位杂交通常首选免疫组化TFE3抗体确认，这是由于荧光原位杂交对变量固定不太敏感，从而有时会产生假阳性或假阴性。由细胞遗传学文献报道提示，作者确认3例Xp11．2转位的肾细胞癌，发现1个新的融合亚型RBM10-TFE3。TFE3重排没有被传统的TFE3断裂探针检测到，但是在干净的背景下我们可见TFE3免疫组化弥漫强阳性。

摘要： 二者本质上一样,但不等同。反转录是进行基因工程过程中,人为地提取出所需要的目的基因的信使RNA,并以之为模板人工合成DNA的过程。逆转录是RNA类病毒形成自己的DNA并整合到宿主细胞的DNA上,以RNA为模板形成DNA的过程。二者虽同为RNA→DNA的过程,但地点不同,相对性的来说,反转录在体外,逆转录在体内。

摘要： 本研究通过自行设计基因特异性反转录引物(Gene-Specific Reverse Primer,GSRP)介导合成cDNA,为解决cDNA 5'末端高GC含量片段的RT-PCR这一难题提供了借鉴.

摘要： 针对新发鸭黄病毒的囊膜蛋白E基因设计了一套引物，建立了用于检测鸭黄病毒的一步法反转录环介导恒温扩增(RT-LAMP)方法。结果显示：该方法对病毒RNA检测具有良好的特异性，灵敏度比普通RT-PCR高百倍以上。RT-LAMP方法简单、快速，可用于对鸭黄病毒RNA的检测。

摘要： 应用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和兔体交叉试验，对采自山东、安徽、苏北等不同地区的疑似猪瘟病料进行检测，显示出RT-PCR诊断技术快速、便捷、准确的特点，提示一些猪场非典型猪瘟感染率比较高，并就此提出加强免疫监测，加大猪瘟兔化弱毒疫苗的免疫剂量，果断淘汰感染母猪等综合性防制措施。

摘要： 应用双抗体夹心酶联(DAS-ELISA)技术和反转录PCR(RT-PCR)技术从荷兰入境的郁金香种球中检测出南芥菜花叶病毒;克隆了该病毒的外壳蛋白(CP)部分基因组序列,序列分析表明获得的病毒基因组(登录号 AM238665)和已经发表的南芥菜花叶病毒(登录号 X55460)核苷酸序列同源性最高为90.00％,根据现在植物病毒Nepovirus的分类标准确认荷兰进口的郁金香种球携带南芥菜花叶病毒.

摘要： 进口种苗经常携带有害生物,对我国的相关产业发展造成威胁.本文对以质量著称的荷兰进口郁金香种球采用生物学测定法、双抗体夹心酶联(DAS-ELISA)法和反转录PCR(RT-RCR)扩增法进行病毒病的病原检测,结果在样品上发现了我国二类检疫性有害生物南芥菜花叶病毒.

摘要： 本文利用RT-PCR技术检测SARS疑似或临床诊断病人咽拭子、血清及淋巴细胞中的SARS病毒.通过采用Trizol试剂或病毒RNA提取试剂盒,抽提SARS疑似患者咽拭子、血清及外周血白细胞中的RNA,进行RT-PCR和nestPCR反应,检测SARS病毒RNA。

摘要： 本文利用RT-PCR技术检测SARS疑似或临床诊断病人咽拭子、血清及淋巴细胞中的SARS病毒.通过采用Trizol试剂或病毒RNA提取试剂盒,抽提SARS疑似患者咽拭子、血清及外周血白细胞中的RNA,进行RT-PCR和nestPCR反应,检测SARS病毒RNA。

摘要： 本文利用RT-PCR技术检测SARS疑似或临床诊断病人咽拭子、血清及淋巴细胞中的SARS病毒.通过采用Trizol试剂或病毒RNA提取试剂盒,抽提SARS疑似患者咽拭子、血清及外周血白细胞中的RNA,进行RT-PCR和nestPCR反应,检测SARS病毒RNA。

摘要： 本文利用RT-PCR技术检测SARS疑似或临床诊断病人咽拭子、血清及淋巴细胞中的SARS病毒.通过采用Trizol试剂或病毒RNA提取试剂盒,抽提SARS疑似患者咽拭子、血清及外周血白细胞中的RNA,进行RT-PCR和nestPCR反应,检测SARS病毒RNA。

摘要： 本文利用RT-PCR技术检测SARS疑似或临床诊断病人咽拭子、血清及淋巴细胞中的SARS病毒.通过采用Trizol试剂或病毒RNA提取试剂盒,抽提SARS疑似患者咽拭子、血清及外周血白细胞中的RNA,进行RT-PCR和nestPCR反应,检测SARS病毒RNA。

摘要： 本发明公开一种适用于高效反转录反应的反转录引物组合，所述反转录引物组合由带有oligo(dT)结构的引物和半随机引物组成。本发明还公开了所述反转录引物在反转录反应中的应用。本发明反转录引物组合在保留了锚定引物优势的同时，避免了普通随机引物所引起的碱基错配和非随机配对，消除传统反转录引物对于mRNA模板5’端、3’端的合成效率偏好性，使mRNA模板各位点能够均匀、无差错地合成到相对应的cDNA中，从而显著提升反转录效率与数据均一性、稳定性。

摘要： 本发明涉及合成的非天然存在的寡核苷酸化合物，该化合物含有其序列定义了一个保守催化区的核苷酸和其序列能够与RNA病毒包装序列内预定的靶序列杂交的核苷酸。优选的，病毒包装序列是反转录病毒包装序列，或是HIV-1Psi包装序列。RNA病毒可以是HIV-1，猫白血病病毒，猫免疫缺损病毒或表I中所列病毒之一。保守催化区可以得自锤头核酶，发夹核酶，肝炎δ核酶，RNAase P核酶，I组内含子，II组内含子。本发明还涉及以RNA病毒为靶的多核酶，含有或不含有反义链的核酶组合物和含有反义链和polyTAR，RRE或TAR引诱物的核酶组合物。本发明还描述了载体。此外，还描述了体内和间接体内的治疗方法和使用方法。

摘要： 本发明涉及一种抗体、其片段或衍生物，用作针对属于人内源性反转录病毒W型(HERV‑W)的病毒的抗反转录病毒药物，其中所述抗体、其片段或衍生物针对HERV‑W包膜蛋白(HERV‑W Env)。本发明还涉及一种组合物，其包含所述抗体和反转录病毒的反转录酶抑制药物，用作靶向属于HERV‑W的病毒的抗反转录病毒药物。

摘要： 本发明涉及一种抗体、其片段或衍生物，用作针对属于人内源性反转录病毒W型(HERV‑W)的病毒的抗反转录病毒药物，其中所述抗体、其片段或衍生物针对HERV‑W包膜蛋白(HERV‑W Env)。本发明还涉及一种组合物，其包含所述抗体和反转录病毒的反转录酶抑制药物，用作靶向属于HERV‑W的病毒的抗反转录病毒药物。

摘要： 本发明公开一种适用于高效反转录反应的反转录引物组合，所述反转录引物组合由带有oligo(dT)结构的引物和半随机引物组成。本发明还公开了所述反转录引物在反转录反应中的应用。本发明反转录引物组合在保留了锚定引物优势的同时，避免了普通随机引物所引起的碱基错配和非随机配对，消除传统反转录引物对于mRNA模板5’端、3’端的合成效率偏好性，使mRNA模板各位点能够均匀、无差错地合成到相对应的cDNA中，从而显著提升反转录效率与数据均一性、稳定性。

摘要： 本发明提出一种利用实时定量反转录PCR监测IVF胚胎培养液质量的反转录反应体系。所述监测培养液质量的方法是利用实时定量反转录PCR分析IVF单个植入前胚胎的基因表达来进行IVF胚胎培养液的质量监测，所述反转录PCR分析IVF单个植入前胚胎的基因表达方法包括步骤：标本收集及纯化；反转录反应；反转录阴性对照和阳性对照；RT产物进行实时定量PCR检测；使用组织细胞RNA进行优化PCR条件；在该条件下同时放大扩增阴性对照和阳性对照；采用相对定量的方法检测目的基因的表达量；以及进行统计学分析。这种改良的实时定量反转录PCR技术非常敏感，高度精确，同时能产生可观的资料。利用这种方法，可以弥补Microarray的不足，对分析单个关键基因在单个细胞的表达和在IVF科研与临床上有非常广泛的应用价值。此方法为确定新的IVF和体外胚胎培养培养液的条件提供了一个重要的监测手段。

摘要： 本发明提出一种反转录PCR分析IVF单个植入前胚胎的基因表达方法的反转录反应体系，所述分析基因表达方法包括步骤：标本收集及纯化；反转录反应；反转录阴性对照和阳性对照；反转录产物进行实时定量PCR检测；使用组织细胞RNA进行优化PCR条件；在该条件下同时放大扩增阴性对照和阳性对照；采用相对定量的方法检测目的基因的表达量；以及进行统计学分析。这种改良的实时定量反转录PCR技术非常敏感，高度精确，同时能产生可观的资料。利用这种方法，可以弥补Microarray的不足，对分析单个关键基因在单个细胞的表达和在IVF科研与临床上有非常广泛的应用价值。此方法为确定新的IVF和体外胚胎培养培养液的条件提供了一个重要的监测手段。

摘要： 本发明提出一种反转录PCR分析IVF单个植入前胚胎的基因表达中的反转录产物PCR体系。所述分析基因表达方法包括步骤：标本收集及纯化；反转录反应；反转录阴性对照和阳性对照；反转录产物进行实时定量PCR检测；使用组织细胞RNA进行优化PCR条件；在该条件下同时放大扩增阴性对照和阳性对照；采用相对定量的方法检测目的基因的表达量；以及进行统计学分析。本发明还提供了反转录产物进行实时定量PCR检测的PCR体系。这种改良的实时定量反转录PCR技术非常敏感，高度精确，同时能产生可观的资料。利用这种方法，可以弥补Microarray的不足，对分析单个关键基因在单个细胞的表达和在IVF科研与临床上有非常广泛的应用价值。此方法为确定新的IVF和体外胚胎培养培养液的条件提供了一个重要的监测手段。

摘要： 本发明涉及合成的非天然存在的寡核苷酸化合物，该化合物含有其序列定义了一个保守催化区的核苷酸和其序列能够与RNA病毒包装序列内预定的靶序列杂交的核苷酸。优选的，病毒包装序列是反转录病毒包装序列，或是HIV-1 Psi包装序列。RNA病毒可以是HIV-1，猫白血病病毒，猫免疫缺损病毒或表I中所列病毒之一。保守催化区可以得自锤头核酶，发夹核酶，肝炎δ核酶，RNAase P核酶，I组内含子，II组内含子。本发明还涉及以RNA病毒为靶的多核酶，含有或不含有反义链的核酶组合物和含有反义链和polyTAR，RRE或TAR引诱物的核酶组合物。本发明还描述了载体。此外，还描述了体内和间接体内的治疗方法和使用方法。

摘要： 本发明公开了一种新的多肽——含有反转录酶区域的反转座子插入子12.1,编码此多肽的多核苷酸和经DNA重组技术产生这种多肽的方法。本发明还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法,如胚胎发育畸形、肿瘤、男性性发育异常等。本发明还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明还公开了编码这种新的含有反转录酶区域的反转座子插入子12.1的多核苷酸的用途。