柑橘叶点霉菌 ISSR－PCR 反应体系的优化

摘要

In order to obtain the optimization of ISSR-PCR reaction system of Phyllosticta citricarpa (McAlp-ine) van der Aa,the concentrations of five factors (Mg 2 +,dNTP,primers,Taq DNA polymerase,template) were re-spectively optimized by single factor test.The result showed that the optimized reaction system consisted of 1.5 mmol/L Mg 2 +,0.15 mmol/L dNTP,0.3 μmol/L primers,25 ng template DNA,0.5 U Taq DNA polymerase.The optimized ISSR-PCR reaction system was stable and credible by the amplification of 21 strains of P.citricarpa.The study would provide the basis for the genetic analysis of P.citricarpa.%为了获得最优柑橘黑斑病病原菌柑橘叶点霉菌 ISSR－PCR 反应体系，利用单因素试验法对反应体系中的5个因素（Mg2＋、dNTP、引物、Taq DNA 聚合酶和模板 DNA）分别设置了不同的浓度梯度进行反应体系的优化。结果表明，在20μL 反应体系中，含有1．5 mmol／L 的 Mg 2＋、0．15 mmol／L 的 dNTP、0．3μmol／L 的引物、25 ng DNA 模板、0．5 U Taq DNA 聚合酶为最优。利用优化的 ISSR－PCR 反应体系对不同地理来源的21株柑橘叶点霉菌菌株进行扩增。结果表明，已建立的体系稳定可靠。柑橘叶点霉菌 ISSR－PCR 反应体系的建立为利用 ISSR 分子标记技术对柑橘叶点霉菌进行遗传分析奠定了基础。