芸芥(Eruca.sativa Mill)总DNA提取方法及RAPD扩增体系研究

摘要

以芸芥9370为材料,在SDS法的基础上,通过改变离心时间,操作步骤,建立了一种较快速提取芸芥基因组DNA的方法.使用美国伯乐公司生产的MycyclerTM thermal cycler扩增仪,对影响RAPD扩增的因素进行了比较研究,确定了模板、10×buffer(主要含Mg2+)、、dNTPs、引物和TaqDNA聚合酶的适宜量和最佳的循环次数.试验结果表明在25μL体系中使用18.5μL ddH2O,2μL 10×buffer(主要含Mg2+),2μLdNTPs,1μL引物,0.5μL TaqDNA聚合酶,1μL模板;反应条件为94℃预变性4 min,然后进行94℃50 s,38℃退火1 min 20 s,72℃延伸2 min,40个循环后,再在72℃延伸10 min,芸芥RAPD扩增效果较好.