蓝莓ISSR-PCR反应体系建立与优化

摘要

以蓝莓为材料,通过正交试验设计和单因子优化试验对影响ISSR-PCR扩增结果的5个因素进行探讨,建立了适合蓝莓ISSR-PCR分析的反应体系和扩增程序,即在50 μL反应总体积中,包含模板DNA 20 ng、ISSR引物0.4 μmol·L-1、dNTPs 0.15 mmol·L-1、Mg2+1.5 mmol·L-1、1.25 U Taq DNA聚合酶和10×buffer 5.0 μL.扩增程序为:94 ℃预变性5 min;94 ℃变性30 s,47 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,30个循环;72 ℃延伸7 min.该体系的建立为利用ISSR标记进行蓝莓遗传分析奠定了基础.