珍稀濒危植物宝华玉兰ISSR-PCR反应体系建立及优化

摘要

为建立和优化宝华玉兰(Magnolia zenii Cheng)ISSR-PCR反应体系,采用正交试验和单因子试验方法对影响PCR扩增体系中的Mg2+、dNTPs、DNA模板、引物和Taq聚合酶一定浓度的用量5个因子进行分析比较.结果显示,宝华玉兰ISSR-PCR 25 μL反应体系中的5个因子最佳水平分别为DNA模板(20 ng/μL)3.5 μL,引物(10 μmol/L)1.25 μL,Taq聚合酶(5 U/μL)0.2 μL,Mg2+(25 mmol/L) 2.0 μL,dNTPs(2.5 mmol/L) 0.8 μL.宝华玉兰ISSR-PCR反应的最优体系建立,为进一步利用ISSR对其进行分子标记辅助育种、分子身份证构建和遗传多样性分析等后续研究奠定了基础.