珍稀濒危植物香果树ISSR-PCR反应体系的筛选与优化

摘要

以珍稀濒危植物香果树(Emm enopterys henryi)基因组DNA为研究对象,测试了ISSR-PCR反应体系的最适退火温度,并通过对反应体系中的Mg2+、dNTP浓度、模板DNA含量,TaqDNA聚合酶量、BSA浓度、引物浓度的筛选和优化,获得了香果树ISSR分析较适宜的扩增条件是:10μL PCR反应体积,1×Taq酶配套缓冲液(10mmol.L-1Tris.HC l pH9.0,50 mmol.L-1KC l,0.1%Triton X-100),2.0 mmol.L-1MgC l2,0.75 UTaq酶,10 ng模板DNA,12 pmol引物;dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0.2 mmol.L-1,2 mg.mL-1牛血清白蛋白。香果树的合适退火温度为48.5℃。