用三对引物检测血液中细菌DNA的方法学

摘要

目的建立稳定、敏感的检测血液中肠源性细菌 DNA的方法。方法取 23例腹部手术后体温 >38.5℃患者的肘静脉血进行血培养，并以酚抽提法提取全血 DNA进行 PCR，靶基因分别为大肠杆菌特异性的β-半糖苷酶基因、脆弱类杆菌特异性的谷氨酰胺合成酶基因，以及大多数细菌所共有的 16SrRNA基因。以标准菌株提取的 DNA为阳性对照，空白对照为阴性对照， 20例健康志愿者全血 DNA为正常对照。对 20例标本重复检测 2次以确定其复现性。结果 PCR复现率为 95％。血培养阳性率为 13.0％（ 3/23）， PCR检测阳性率为 43.5％（ 10/23），较血培养阳性率高（ P=0.016）。结论按照规范进行的 PCR检测血液中肠源性细菌方法稳定，比血培养敏感。