AFP启动子对绿色荧光蛋白在人肝癌细胞中表达的影响

摘要

目的研究AFP 5′端3.1kb启动子序列对GFP在人肝癌细胞中表达的影响.方法首先采用重组DNA技术,构建了由AFP5′端前导序列(AFP启动子+AFP EI增强子,3.1 kb)调控的绿色荧光蛋白(GFP)报告基因哺乳动物表达载体pcDNA3-GFP-AFP-w,然后将pcDNA3GFP-AFP-w、pcDNA3-GFP及空载(pcDNA3-neo)经lipofectin分别转染Be17402、Hela二种肿瘤细胞,G418抗性筛选得到含各不同质粒的稳定阳性细胞克隆,Western blotting和密度积分扫描检测GFP基因的表达.结果转染pcDNA3-GFP-AFP-w细胞的GFP表达量在Bw17402中明显高于Hela细胞,在Hela细胞中GFP几乎不表达,但均低于相应转染pcDNA3-GFP的细胞,呈现一定的专一性.结论 AFP5′端3.1 kb启动子序列调控的GFP报告基因载体pcDNA3-GFP-AFP-w对Be17402肝癌细胞呈现一定的细胞专一性.