睾丸特异的核孔蛋白BS-63与transportin(karopherin beta2)结合区域的确定以及体外结合的证明

摘要

目的确定睾丸特异的核孔蛋白BS-63与transportin(karopherin beta2)的结合区域,体外验证BS-63与transportin的结合作用.方法将BS-63 C端分成不同长度的片段,采用酵母双杂交技术确定与transportin阳性克隆的结合区域.分别于大肠杆菌中表达上述相互作用片段,并进一步运用pull down实验在体外验证BS-63与transportin的结合作用.结果 BS-63 C端与transportin相结合的区域从起始的1.6kb确定至包括一个Ran bindingdomain(RanBD)在内0.6kb的范围内.Pulldown以及Western blot证实此区域在体外可与transportin相结合.结论在生精细胞中,位于胞质侧的睾丸特异的核孔蛋白BS-63将被转运物向核内的转运过程可能是由transportin协助完成的.