致密斑细胞COX-2的表达及AP-1、NFκB信号通路

摘要

目的 评估低盐(LS)培养对小鼠致密斑(MMDD1)细胞环氧化酶-2(COX-2)表达及核因子-κB(NF-κB)和活化蛋白-1(AP-1)活性的影响.方法 经脂质体转染含NF-κB或AP-1的报告质粒,采用瞬时表达方法检测正常盐(NS)与LS培养对NF-κB和AP-1转录活性的影响.采用RT-PCR检测MMDD1细胞COX-2表达的变化,Western blot方法检测细胞内p-p38 MAPK、p-p44/42、c-Jun、c-Fos 和COX-2蛋白的表达.结果 LS培养促进了MMDD1细胞COX-2 mRNA和蛋白表达(P＜0.01).LS培养后,p38和p44/42的磷酸化程度显著上调(P＜0.01),180 min后达到高峰.p38抑制剂SB-203580、p44/42抑制剂PD-98059可降低LS诱导的COX-2表达(P＜0.01).LS培养促进了c-Jun、c-Fos蛋白表达(P＜0.01),激活了AP-1和NF-κB的转录活性 (P＜0.01).25 μmol/L NF-κB抑制剂PDTC 和20 μmol/L AP-1抑制剂curcumin下调了LS诱导的NF-κB、AP-1活性(P＜0.01).25 μmol/L PDTC 、20 μmol/L curcumin 降低了LS诱导的COX-2 mRNA和蛋白表达(P＜0.01).结论 LS培养可促进MMDD1细胞COX-2的表达,其作用可能与促进p38MAPK、p44/42激酶的磷酸化,增加NF-κB和AP-1的活性有关.