辐照联合表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂对中心体调节激酶(Aurora-A)高表达的非小细胞肺癌细胞系增殖的影响

摘要

背景Aurora-A丝/苏氨酸激酶作为维持染色体稳定的中心体调节关键激酶,在许多肿瘤中表达,并与预后不良和放射抗拒相关。放疗联合表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)在Aurora-A高表达的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的作用尚不明确。目的探讨辐照联合EGFR-TKI对Aurora-A高表达的NSCLC细胞系的抑制作用。方法在A549和GLC82细胞系中筛选Aurora-A相对高表达的NSCLC细胞系,从吉非替尼(Gefitinib)和埃克替尼(Icotinib)中选择针对EGFR作用更明显的靶向药物。比较辐照联合靶向药物作用后Aurora-A及EGFR下游信号通路相关蛋白(Akt和Stat1)表达、细胞周期分布与辐照剂量之间的关系;通过流式细胞仪检测Aurora-A siRNA干预前后辐照联合靶向药物对细胞凋亡的影响;通过细胞克隆形成实验,观察辐照联合靶向药物对细胞凋亡率的影响。结果筛选发现GLC82细胞系是Aurora-A相对高表达的NSCLC细胞系,Icotinib对Aurora-A高表达GLC82细胞系的EGFR及其磷酸化蛋白水平抑制作用更明显。在GLC82细胞系中,与单纯Icotinib相比,Icotinib联合辐照2 Gy组的p-EGFR/EGFR、p-Aurora-A/Aurora-A、p-Akt/Akt和p-Stat1/Stat1蛋白表达水平均无统计学差异(P>0.05);Icotinib联合辐照10 Gy组,p-Aurora-A/Aurora-A和p-Akt/Akt表达明显下降(P0.05),Aurora-A siRNA干预后明显增加Icotinib组、辐照(2 Gy,10 Gy)组和Icotinib联合辐照10 Gy组的敏感度,促进GLC82细胞凋亡(P<0.05)。细胞克隆实验表明,与单纯辐照相比,辐照联合Icotinib可以明显促进GLC82细胞凋亡。结论辐照联合Icotinib可以逆转Aurora-A引起的放射抗拒,促进GLC82细胞凋亡。