猪膀胱细胞外基质对人脐带Wharton胶间充质干细胞生物相容性实验

摘要

目的探索化学法制备的猪膀胱细胞外基质（porcine bladder accellular matrix,PBAM）对人脐带Wharton胶间充质干细胞（Wharton＇s jelly mesenchymal stem cells,WJ-MSCs）的生物相容性,为组织工程膀胱的研究提供新的种子细胞。方法采用化学脱细胞法制备PBAM,行HE、甲苯胺蓝、Hoechst33258荧光染色检测脱细胞效果,扫描电镜观察PBAM形态,无水乙醇法检测其孔隙率。组织块法培养WJ-MSCs,观察形态并及行成骨、成脂诱导。比较不同浓度的PBAM浸提液对WJ-MSCs增殖的影响。实验组将WJ-MSCs复合至PBAM进行培养,对照组以DMEM培养,第3、5、7天收集细胞并计数,对细胞-支架复合物行Hoechst33258及AO染色,扫描电镜观察WJ-MSCs在PBAM上的生长状态。结果化学脱细胞法成功制备的PBAM。HE、甲苯胺蓝和Hoechst33258染色证实PBAM上无细胞残留,扫描电镜（SEM）观察PBAM表面呈多孔结构,孔隙率为93%。组织块法培养WJ-MSCs第6天可见WJ-MSCs呈鱼群样排列,行成脂、成骨诱导后,油红＂O＂和茜素红染色阳性。不同浓度PBAM浸提液对WJ-MSCs的增殖效果与DMEM培养液无差异。两组增殖高峰均在第5天,实验组细胞增加率高于对照组（P 〈0.05）。将WJ-MSCs复合至PBAM培养第5天后,Hoechst33258染色见大量WJ-MSCs生长于PBAM表面,AO染色提示为活细胞。电镜扫描可见大量人脐带WJ-MSCs黏附生长。结论 PBAM对WJ-MSCs具有较好的相容性,可为进一步研究组织工程膀胱提供实验基础。