耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对喹诺酮类药物的耐药特性及机制研究

摘要

背景 耐碳青霉烯类肺炎克雷伯(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)对喹诺酮类药物的耐药机制及对新一代喹诺酮类药物西他沙星的耐药特性目前国内未见相关研究。目的 研究CRKP对喹诺酮类药物的耐药特性及耐药机制。方法 收集解放军总医院临床分离非重复耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌29株,采用微量肉汤稀释法检测CRKP对喹诺酮类药物的敏感度及外排泵抑制剂对CRKP耐药性的影响;通过棋盘法检测西他沙星联合其他抗菌药物对CRKP的体外抗菌活性;采用Sanger测序检测喹诺酮耐药决定区(quinolone resistance determining region,QRDR)突变;全基因组测序检测质粒介导的喹诺酮耐药基因(plasmid mediated quinolone resistance,PMQR)、外排泵、多位点序列分型等分子病原学特征。结果 29株CRKP对西他沙星、莫西沙星、环丙沙星的耐药率分别为90%、93%、93%,西他沙星MIC50值是莫西沙星的4倍、环丙沙星的8倍。西他沙星对blaKPC、blaNDM、blaOXA-48阳性的CRKP的敏感度分别为4.7%、66.6%、0。联合药敏结果表明西他沙星与黏菌素、依拉环素、替加环素联合用药对CRKP的协同、部分协同及相加作用分别为70%、20%、6%。blaKPC、blaNDM、blaOXA-48阳性的CRKP的QRDR突变率分别为95%、0、100%;质粒介导的PMQR携带率为83%;RND家族外排泵在CRKP菌株中普遍携带,外排泵抑制剂使CRKP对西他沙星的敏感度由10%上升至83%,耐药率由90%降至7%。解放军总医院优势传播菌株为ST11型blaKPC-2阳性菌株。结论 CRKP对喹诺酮类药物耐药率高,西他沙星与黏菌素的协同效果最好。QRDR突变和外排泵过表达是CRKP对喹诺酮类药物主要的耐药机制,产NDM酶CRKP的QRDR未见突变并且对喹诺酮类药物敏感性较好;ST11型blaKPC-2阳性菌株是解放军总医院优势流行菌株。