Gankyrin在慢性肝炎、肝硬化及肝细胞癌中的表达及临床病理学意义

摘要

目的：分析Gankyrin参与肝细胞炎症及恶性转化的机制，探讨其在临床病理学诊断及治疗的意义。
　　 材料和方法：共选取2000年1月-2009年12月在我院行手术切除，福尔马林固定、石蜡包埋的肝组织404例，具体分组如下：第一组：选取2000年1月-2005年12月在我院行肝细胞癌手术切除的病例，进行随访，共获得完整随访资料194例，分析Gankyrin的表达与预后的关系；第二组：随机法选取2006年1月-2008年12月在我院行肝细胞癌手术切除的并具有完整临床病理信息的病例118例，两组病例共获得肝细胞癌312例；第三组：复习上述病例的病理切片，找出伴有非典型增生结节（区域）的病例共49例，再从2004年7月至2009年12月在我院行手术切除、病理诊断为非典型结节性增生的病例中，通过随机数字法选取58例，共获得非典型增生病例107例；第四组：随机数字法选取我院2009年行肝海绵状血管瘤的病例33例作为正常肝组织对照。上述4组病例均进行Gankyrin免疫组化染色，分析其表达水平与临床病理学特征的相关性。选取手术切除新鲜肝细胞癌及对应癌旁组织的标本23例，进行westernblot及RT-PCR4分析，检测组织中Gankyrin的蛋白质及mRNA表达水平。通过干涉肝癌细胞系HepG2细胞的Gankyrin表达，进行软琼脂克隆形成实验、平板克隆形成实验、迁移实验及生长曲线的实验研究，观察Gankyrin对肝癌细胞的恶性转化、增殖及迁移能力的影响；在体外细胞培养中，通过干涉及过表达Gankyrin，检测在正常培养或T NF-α刺激下，Gankyrin对NF-κB活性的影响。
　　 结果：1）404例肝组织中Gankyrin的免疫组化结果以及Westernblot、RT-PCR结果显示：Gankyrin高表达于肝细胞癌及非典型增生结节，分布于细胞质及细胞核；中等表达于癌旁肝组织，仅分布于细胞质；在无慢性炎症的肝海绵状血管瘤旁的肝组织内表达呈阴性。4组病例间，除肝细胞癌与非典型增生组无差异外，均有显著性差异（p=0.000）；
　　 2）癌旁肝组织中Gankyrin的表达量依有无慢性肝炎或肝硬化而不同，除慢性肝炎与肝硬化之间无差异（p=0.094）外，各组间差异均有显著性意义（p<0.01）。
　　 3）在肝细胞癌组中，Gankyrin的细胞核表达水平与肝内转移（P=0.03745）以及癌旁的炎症及硬化情况（p=0.0399）呈正相关，细胞内总的Gankyrin表达量与癌旁肝炎及肝硬化情况（p=0.03489）呈正相关，并与肝细胞癌的Top-Ⅱα的表达（p=0.03091）呈正相关，而Gankyrin的细胞质表达仅与Top-Ⅱα的表达呈正相关（p=0.03091）。
　　 4）在细胞水平试验中，干涉Gankyrin的表达，HepG2细胞的克隆形成能力及增殖能力下降，但迁移能力不受影响；在正常培养或TNF-α刺激情况下，干涉Gankyrin可使NF-κB的活性增高，而过表达Gankyrin则可抑制NF-κB的活性。5）.肝癌中Gankyrin的表达水平与预后无相关性。
　　 结论：
　　 1）Gankyrin具有对肝细胞的恶性转化能力，并能促进肝癌细胞的增殖；2）Gankyrin的促癌作用发生在恶性转化的早期，而对肿瘤的进展作用不显署；3）Gankyrin的表达部位的差异可作为恶性转化的指征，在病理诊断中鉴别增生与非典型增生；4）Gankyrin可能参与炎症过程，且与TNF-α/NF-κB信号通路有关。

目录

文摘

英文文摘

英文缩写汇总

前言

材料与方法

材料来源

试剂配制

实验方法

1.第一部分

2.第二部分

3.第三部分

结果

1.第一部分

2.第二部分

3.第三部分

讨论

结论

课题创新性及下一步工作计划

附图1

附图2

参考文献

文献综述（一）

参考文献

文献综述（二）

参考文献

在读期间发表文章

致谢