视网膜小胶质细胞在糖尿病大鼠视网膜神经病变中的作用研究

摘要

目的：
　　1.研究视网膜小胶质细胞在STZ诱导的糖尿病大鼠视网膜中活化的特点，包括细胞形态、细胞密度、在视网膜各层分布、活化小胶质细胞比率以及视网膜中小胶质细胞特异性表面分子Iba-1mRNA表达的改变。
　　2．研究氯膦酸二钠脂质体经玻璃体腔注射后对正常及糖尿病大鼠视网膜小胶质细胞的清除作用。
　　3.研究正常与糖尿病大鼠视网膜小胶质细胞经氯膦酸二钠脂质体清除后对视网膜神经病变的影响，包括神经节细胞的数量、神经节细胞凋亡程度及内层视网膜厚度的改变，同时检测视网膜中TNF-α与IL-1β表达的改变，探讨如果小胶质细胞对糖尿病视网膜神经病变产生影响，以上两种炎症因子是否参与。
　　方法：
　　1.一次性腹腔注射STZ诱导1型糖尿病大鼠模型，在正常对照及糖尿病4周、8周、12周大鼠中，OX-42免疫组化染色观察视网膜中小胶质细胞的细胞形态、细胞密度、在视网膜各层分布、活化小胶质细胞比率及其在视神经中的分布；Real-timePCR法检测视网膜中Iba-1mRNA表达的改变。
　　2.正常对照及糖尿病3周、4周、5周大鼠给予玻璃体腔注射氯膦酸二钠脂质体，对侧眼注射PBS作为对照，注射1周后通过OX-42免疫组化染色及细胞计数观察氯膦酸二钠脂质体对视网膜小胶质细胞的清除作用；糖尿病3周大鼠给予玻璃体腔注射氯膦酸二钠脂质体，对侧眼注射PBS作为对照，于注射2周、3周及4周后同样方法观察氯膦酸二钠脂质体对糖尿病大鼠视网膜小胶质细胞清除作用的持续时间。
　　3.正常对照及糖尿病3周大鼠给予玻璃体腔注射氯膦酸二钠脂质体，对侧眼注射PBS作为对照，3周后重复注射1次，于第2次玻璃体腔注射2周后，OX-42免疫组化染色标记视网膜小胶质细胞及Real-timePCR法检测视网膜中Iba-1mRNA表达，观察氯膦酸二钠脂质体对正常及糖尿病大鼠视网膜小胶质细胞的清除作用；NeuN免疫组化染色与细胞计数观察视网膜神经节细胞数量的改变，NeuN免疫荧光与TUNEL共染色观察视网膜神经节细胞凋亡程度的改变，视网膜切片HE染色观察内层视网膜厚度的改变；Real-timePCR法检测视网膜中TNF-α与IL-1βmRNA表达的改变。
　　结果：
　　1.在糖尿病4周、8周及12周大鼠视网膜中部分小胶质细胞呈阿米巴状，或胞体显著变大同时细胞突起变粗变短，细胞形态与正常视网膜中分枝状的小胶质细胞明显不同；小胶质细胞密度在正常与糖尿病各组大鼠之间没有明显区别；在正常与糖尿病各组大鼠，小胶质细胞主要位于神经纤维层/神经节细胞层和内丛状层，糖尿病12周大鼠视网膜中位于神经纤维层/神经节细胞层的小胶质细胞比率较其他各组明显升高，同时位于内丛状层的小胶质细胞比率较其他各组明显降低；糖尿病各组大鼠视网膜中活化小胶质细胞的比率较正常对照组均明显升高；小胶质细胞在正常对照及糖尿病4周大鼠视神经中沿神经纤维呈纵行分布，在糖尿病8周及12周大鼠视神经中，小胶质细胞突起增多，纵行分布不明显，出现紊乱；糖尿病8周及12周大鼠视网膜中Iba-1mRNA含量较正常对照组明显升高。
　　2.氯膦酸二钠脂质体经玻璃体腔注射1周后，与对侧PBS注射眼比较，正常对照大鼠视网膜小胶质细胞数量无明显改变，糖尿病3周、4周、5周大鼠视网膜中小胶质细胞数量明显减少；糖尿病3周大鼠，经氯膦酸二钠脂质体玻璃体腔注射2周、3周后，视网膜小胶质细胞数量较对侧眼明显减少，注射4周后小胶质细胞数量与对侧眼比较无明显区别。
　　3.氯膦酸二钠脂质体经玻璃体腔注射5周后，与对侧PBS注射眼比较，正常对照及糖尿病大鼠视网膜中小胶质细胞数量均明显减少，同时视网膜Iba-1mRNA含量也明显减少；糖尿病大鼠PBS注射眼视网膜神经节细胞数量及内层视网膜厚度较正常大鼠PBS注射眼明显减少，经氯膦酸二钠脂质体注射5周后，正常大鼠视网膜神经节细胞数量及内层视网膜厚度无明显改变，糖尿病大鼠视网膜神经节细胞数量及内层视网膜厚度较对侧PBS注射眼明显增加；糖尿病大鼠PBS注射眼视网膜TNF-αmRNA含量较正常大鼠PBS注射眼明显升高，氯膦酸二钠脂质体注射5周后，正常对照及糖尿病大鼠视网膜TNF-αmRNA含量较自身对侧眼均明显下降；糖尿病大鼠PBS注射眼视网膜IL-1βmRNA含量与正常大鼠PBS注射眼比较无明显差异，氯膦酸二钠脂质体注射5周后，糖尿病大鼠视网膜IL-1βmRNA含量较自身对侧眼明显下降。
　　结论：
　　1.小胶质细胞在糖尿病大鼠视网膜中发生活化，表现为细胞形态改变、在视网膜中分布的改变及活化小胶质细胞比率的增加；同时小胶质细胞Iba-1mRNA表达增加。
　　2.氯膦酸二钠脂质体经玻璃体腔注射能够明显减少正常及糖尿病大鼠视网膜小胶质细胞的数量。
　　3.在糖尿病大鼠中，氯膦酸二钠脂质体减少视网膜小胶质细胞数量后，糖尿病引起的视网膜神经节细胞数量减少及内层视网膜厚度减少均得到改善，同时视网膜中Iba-1及炎症因子TNF-α与IL-1βmRNA表达受到抑制。
　　4.糖尿病大鼠视网膜中的小胶质细胞通过炎症因子TNF-α及IL-1β，在糖尿病引起的视网膜神经节细胞丢失及内层视网膜厚度减少中发挥作用。

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前 言

第一部分：小胶质细胞在糖尿病大鼠视网膜中的活化

材料和方法

结 果

讨 论

参考文献

第二部分：氯膦酸二钠脂质体对视网膜小胶质细胞的清除作用

材料和方法

结 果

讨 论

参考文献

第三部分：小胶质细胞对糖尿病大鼠视网膜神经病变的影响

材料和方法

结 果

讨 论

参考文献

全文总结

综 述

参考文献

个 人 简 历