宫颈癌筛查新方法及标志物的临床应用价值初探

摘要

目的:
　　评价叶酸受体介导上皮特殊染色液、肿瘤细胞周期和表达相关蛋白和HPV E6/E7 mRNA分型检测在宫颈癌筛查中的应用价值，明确叶酸受体、肿瘤细胞周期和表达相关蛋白在宫颈病变组织和宫颈脱落细胞中的表达。
　　方法:
　　1、对231例门诊欲行宫颈癌筛查者，前瞻性行液基细胞学检查(TCT)、人乳头瘤病毒检测(HPV)和叶酸受体介导上皮特殊染色液(FRD)检查，并以病理诊断为金标准，计算并对比TCT、HPV和FRD的敏感度、特异度等诊断价值指标。
　　2、通过荧光定量PCR方法，对153例宫颈脱落细胞行HPV DNA分型、HPVE6/E7 mRNA分型，并分析HPV DNA与E6/E7 mRNA检测的一致性。以47例病理诊断为金标准，计算并对比不同型别HPV DNA阳性者、不同型别HPV E6/E7mRNA阳性者患高级别宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的相对危险度(OR)。
　　3、通过免疫组织化学方法，检测231例病理组织中叶酸受体、肿瘤细胞周期和表达相关蛋白的表达，并采用荧光定量PCR，检测宫颈脱落细胞中叶酸受体、肿瘤细胞周期和表达相关蛋白mRNA的表达;同时，向宫颈癌细胞株C33A中转染携带HPV E6、E7基因的质粒，通过Western Blot检测叶酸受体的表达变化。
　　结果:
　　1、高级别宫颈上皮内瘤变和宫颈癌发生的平均年龄为40.15±8.03岁。FRD诊断敏感度77.53％，特异度55.63％，与TCT相比无显著统计学差异。FRD诊断符合率64.07％，高于HPV和TCT，有显著统计学差异。FRD使用的小棉签对宫颈病变的诊断效率较低。与≥ASCUS时诊断TCT异常相比，＞ASCUS时诊断TCT异常的诊断效率更高。HPV检测对CIN2以上病变的阴性预测值为100％。HPV定量(HC2)与HPV分型诊断的敏感度和特异度无显著统计学差异。
　　2、HPV16的感染率最高，其次是HPV52、HPV58。HPV E6/E7 mRNA检测的阳性率与HPV DNA拷贝数相关。高危型HPV混合感染和混合低危型HPV感染均不影响HPV E6/E7 mRNA分型检测。HPV16、18 DNA阳性者发生CIN2以上病变的风险显著高于其他类型感染。HPV E6/E7 mRNA阳性者发生CIN2以上病变的风险显著高于单纯HPV DNA阳性者。HPV16、18型E6/E7 mRNA阳性者，发生CIN2以上病变风险，显著高于HPV DNA阳性者和其他型HPV E6/E7 mRNA阳性者。
　　3、叶酸受体、CREPT在组织病理学诊断的宫颈炎和低级别上皮内瘤变中均低表达，在高级别上皮内瘤变和宫颈癌中高表达，且有显著统计学差异。叶酸受体、CREPT mRNA在不同程度宫颈病变者的脱落细胞中无显著统计学差异。瞬时转染HPV E6、E7前后，C33A细胞中叶酸受体表达未见变化。
　　结论:
　　1、FRD诊断敏感度和特异度与TCT相比无显著统计学差异，且诊断符合率高于HPV和TCT。HC2与HPV分型诊断的敏感度和特异度无显著统计学差异，HPV检测对CIN2以上病变的阴性预测值极高。
　　2、HPV E6/E7 mRNA阳性者发生CIN2以上病变的风险显著高于单纯HPVDNA阳性者。HPV16、18型E6/E7 mRNA阳性者，发生CIN2以上病变风险，显著高于单纯HPV DNA阳性者和其他型HPV E6/E7 mRNA阳性者。
　　3、叶酸受体、CREPT在组织病理学诊断的宫颈炎和低级别宫颈上皮内瘤变中低表达，在高级别宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中高表达。叶酸受体、CREPT mRNA在不同程度宫颈病变者的脱落细胞中无显著统计学差异。瞬时转染HPV E6、E7前后，C33A细胞中叶酸受体表达未见变化。转染E7、共转染E6/E7后，CREPT的表达略有升高。

目录

声明

中英文缩略词

摘要

前言

第一章 叶酸受体介导上皮特殊染色液在宫颈病变筛查中的诊断价值研究

第一节 实验目的

第二节 实验材料

第三节 实验方法

第四节 结果

第五节 讨论

小结

第二章 HPV E6／E7 mRNA分型在宫颈病变筛查中的应用价值研究

第一节 实验目的

第二节 实验材料

第三节 实验方法

第四节 结果

第五节 讨论

小结

第三章 HPV E6／E7、叶酸受体及CREPT与宫颈病变的相关性研究

第一节 实验目的

第二节 实验材料

第三节 实验方法

第四节 结果

第五节 讨论

小结

结论

参考文献

综述 HPV E6／E7研究现状及临床展望

个人简历

致谢